【摘 要】
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目的 探讨beclin1基因对缺氧缺糖/复氧复糖小鼠海马神经元细胞系HT22细胞凋亡的影响.方法 取对数生长期的HT22细胞,随机分为4组:正常组(normal)、缺氧缺糖/复氧复糖(OGD/R)模
【机 构】
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河北中医学院,河北省心脑血管病中医药防治研究重点实验室,石家庄050091
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目的 探讨beclin1基因对缺氧缺糖/复氧复糖小鼠海马神经元细胞系HT22细胞凋亡的影响.方法 取对数生长期的HT22细胞,随机分为4组:正常组(normal)、缺氧缺糖/复氧复糖(OGD/R)模型组(model)、beclin1基因沉默组(beclin1-/-)、转染对照组(control).除normal组外,其余各组细胞均在缺氧缺糖6h后进行复氧复糖.利用RNAi技术,针对小鼠cDNA序列设计beclin1干扰序列,用脂质体Lipo2000包裹后转染至HT22细胞.于转染48 h后用荧光显微镜观察转染效率,Western blotting检测细胞beclin1表达情况.各组细胞均于复氧复糖24 h后采用CCK-8法检测细胞活力,乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞损伤情况,免疫荧光染色检测Bax、Bcl-2表达及比值变化,Western blotting检测LC3、P62及Caspase-3表达.SPSS 19.0统计学软件进行数据分析.结果 与normal组相比,model组细胞活力及P62蛋白表达显著降低(P＜0.01),乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ、Caspase-3表达及Bax/Bcl-2均显著升高(P＜0.01).与model组相比,beclin 1-/-组细胞活力及LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ表达显著降低(P＜0.01),LDH漏出率、Bax/Bcl-2及P62、Caspase-3表达显著升高(P＜0.01);control组与model组比较差异无显著性.结论 沉默beclin1抑制细胞自噬可使缺氧缺糖/复氧复糖处理的HT22细胞损伤加重,细胞凋亡进一步增加.
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