目的 了解KC热损伤后培养上清液对真皮Fb生物学行为的影响.方法 分离培养人真皮Fb,另建立KC（选用HaCaT细胞）热损伤模型.收集正常堵养及热损伤后12 h的KC培养上清液,用无血清DMEM以1：1体积比稀释,分别制成正常KC和热损伤KC 2种条件培养液.将Fb分别用无血清DMEM和2种条件培养液培养：（1）于培养12、24、36、48 h时,采用噻唑蓝法检测Fb增殖活性;（2）于培养12 h时,用流式细胞术检测Fb的凋亡情况（Fb预先致热损伤,并增设Fb伤后无处理对照）;（3）培养24 h时,用免疫荧光法检测Fb胞质α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达情况,并用实时定量PCR法测定Fb α-SMA mRNA的表达.对实验结果进行单因素方差分析,用LSD-t检验行组间两两比较.结果 （1）Fb增殖活性：Fb经热损伤KC条件培养液培养12、24、36、48 h时,其吸光度值均高于同时相点用无血清DMEM培养的Fb（t值分别为1.89、2.35、2.02、1.94,P值均小于0.01）;其中12、24、48 h时与用正常KC条件培养液培养的Fb比较,差异有统计学意义（12 h时t=1.83,P〈0.01;24 h时t=2.91,P〈0.05;48 h时t=1.83,P〈0.05）.（2）Fb凋亡检测：热损伤KC条件培养液培养的Fb与正常KC条件培养液培养以及伤后无处理的Fb比较,凋亡率均明显下降（t=3.31,P〈0.05;t=1.47,P〈0.01）.（3）Fb胞质α-SMA表达：荧光显微镜下可见,用无血清DMEM或正常KC条件培养液培养的Fb中,α-SMA阳性表达（红色荧光）细胞较少;热损伤KC条件培养液培养的Fb中,α-SMA阳性表达细胞明显增多.（4）α-SMA mRNA表达：热损伤KC条件培养液培养的Fb α-SMA mRNA相对表达量为1.32±0.06,高于正常KC条件培养液培养的Fb（1.14±0.07,t=2.51,P〈0.05）和无血清DMEM培养的Fb（1.00±0.09,t=1.77,P〈0.05）.结论 KC热损伤后12 h培养上清液可明显促进Fb增殖、抑制Fb凋亡、促进Fb向肌成纤维细胞转分化.
热损伤角质形成细胞培养上清液对成纤维细胞生物学行为的影响
【摘 要】
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目的 了解KC热损伤后培养上清液对真皮Fb生物学行为的影响.方法 分离培养人真皮Fb,另建立KC（选用HaCaT细胞）热损伤模型.收集正常堵养及热损伤后12 h的KC培养上清液,用无血清DMEM以1：1体积比稀释,分别制成正常KC和热损伤KC 2种条件培养液.将Fb分别用无血清DMEM和2种条件培养液培养：（1）于培养12、24、36、48 h时,采用噻唑蓝法检测Fb增殖活性;（2）于培养12 h
【机 构】
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第四军医大学西京医院烧伤与皮肤外科,西安710032,第四军医大学西京医院烧伤与皮肤外科,西安710032,第四军医大学西京医院烧伤与皮肤外科,西安710032,第四军医大学西京医院烧伤与皮肤外科,西
【发表日期】
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2010年26期
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