【摘 要】
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本研究以苔草属植物10个野生种为试材,采用L16(45)正交试验设计,对影响ISSR-PCR反应的Taq DNA聚合酶、Mg2+、dNTPs、引物及模板DNA以及退火温度、循环次数等因素进行优化试验
【机 构】
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山东农业大学园艺科学与工程学院,作物生物学国家重点实验室,国家苹果工程技术中心,泰安,271018;山东农业大学林学院,泰安,271018;山东农业大学生命科学学院,泰安,271018
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本研究以苔草属植物10个野生种为试材,采用L16(45)正交试验设计,对影响ISSR-PCR反应的Taq DNA聚合酶、Mg2+、dNTPs、引物及模板DNA以及退火温度、循环次数等因素进行优化试验.研究结果表明,苔草属植物的最优ISSR-PCR反应体系,即25 μL反应体积中,含Taq DNA聚合酶1.5 U,Mg2+ 1.5 mmol/L,DNA模板150 ng,引物0.24 μmol/L,dNTPs 0.25 mmol/L.苔草属植物的最佳扩增程序,即:94℃预变性3 min; 94℃变性30 s,退火45 s,72℃延伸1.5 min,38个循环;72℃延伸7 min;4℃保存.采用优化后的体系对10份苔草属植物进行扩增,能扩增出清晰明亮的条带,表明该反应体系和扩增程序适于苔草属植物的ISSR分析,为进一步开展苔草属植物的遗传多样性分析、分子系统学研究及种质资源评价奠定了基础.
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