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目的：构建骨保护素（OPG）N端片段的酵母表达载体。方法：OPGN端D1—D4域仅由2个外显子编码。以人基因组DNA为模板．PCR分别扩增外显子2和外显子3，并使外显子2的3’引物和外显子3的5’引物具有相互重叠的一段序列。以2种PCR产物混合物为模板，采用重组PCR扩增OPGN端编码序列，拟插入酵母分泌型表达载体pPIC9K。为使未来分泌表达产物具有完全正确的N末端，再次采用重组PCR策略，将pPIC9K信号肽裂解位点前的一段序列（含单一限制酶位点BamHⅠ）与OPGN端编码序列拼接在一起，从BamH