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目的 制备重组日本血吸虫核糖核酸酶T2蛋白(rSj RNase T2),并分析其生物学功能.方法 根据编码RNase T2开放阅读的基因序列设计、合成一对5’端带有酶切位点的引物.采用PCR方法从质粒CP1412/PEU-GST中扩增编码RNase T2蛋白成熟肽的基因片段,亚克隆到表达载体pET28a(+)中,构建重组表达质粒Sj RNase T2-pET28a.将重组表达质粒转化到E.coli BL21中,用异丙基-pn硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,用镍螯合亲和层析胶在变性条件下纯化rSj RNase T2蛋白.纯化蛋白通过尿素浓度梯度透析的方法进行复性,制备可溶性rSjRNase T2.以酵母RNA为底物进行消化,采用琼脂糖凝胶电泳的方法检测rSj RNase T2酶活性.用纯化的rSj RNase T2免疫小鼠,采用酶联免疫法(ELISA)检测小鼠血清特异抗体水平,观察其抗原性;采用检测Western blot抗rSj RNase T2抗体IgG与成虫可溶性虫抗原、成虫外分泌抗原、虫卵可溶性抗原和虫卵外分泌抗原的反应性,并观察Sj RNase T2在虫体中的分布.以rSj RNase T2刺激巨噬细胞RAW264.7,通过流式分析观察RAW264.7细胞表面标志物CD16/32、CD206表达水平的变化,采用RT-PCR检测RAW264.7细胞内诱导型一氧化氮合酶与精氨酸酶基因mRNA的表达水平,采用ELISA检测RAW264.7细胞培养上清液中IL-12及IL-10水平的变化,以观察Sj RNase T2的免疫调节功能.结果 重组表达质粒Sj RNase T2-pET28a构建成功,经IPTG诱导,能表达重组Sj RNase T2蛋白.该蛋白以包涵体形式存在,经过复性能获得部分可溶性蛋白.rSj RNase T2具有酶活性,能够水解酵母RNA.ELISA检测rSjRNase T2免疫小鼠血清特异性抗体滴度为1:200 000,该抗血清能识别来源于血吸虫虫卵及虫卵外分泌抗原中的天然RNaseT2.rSj RNase T2可诱导巨噬细胞向M2型方向转化,表达高水平的IL-10、精氨酸酶及CD206表面分子.结论 rSj RNase T2表达成功.该蛋白具有天然的酶学特性和抗原性,能调节巨噬细胞向M2型方向分化.