【摘 要】
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目的 开发一种适用于中国大规模人群新型冠状病毒(SARS-CoV-2)感染筛查的核酸检测试剂盒,分析对多样本混合检测的效果,为临床多样本混合检测提供理论指导.方法 选用SARS-CoV-2的ORF1ab、N 2个靶基因,并加入RNase P作为内标基因进行试剂盒研发.采用单一变量及正交实验优化试剂盒中3个靶基因引物及探针浓度比例.评价试剂盒的准确性、特异性及灵敏度.收集阳性样本与阴性样本按不同比例混合,采用本试剂盒及市售参比试剂盒分别检测混合样本的SARS-CoV-2,比较不同试剂盒检测不同靶标的检出浓度
【机 构】
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山东大学附属济南市中心医院 医学实验诊断中心,山东 济南250013;山东英盛生物技术有限公司 研发中心,山东 济南250100
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目的 开发一种适用于中国大规模人群新型冠状病毒(SARS-CoV-2)感染筛查的核酸检测试剂盒,分析对多样本混合检测的效果,为临床多样本混合检测提供理论指导.方法 选用SARS-CoV-2的ORF1ab、N 2个靶基因,并加入RNase P作为内标基因进行试剂盒研发.采用单一变量及正交实验优化试剂盒中3个靶基因引物及探针浓度比例.评价试剂盒的准确性、特异性及灵敏度.收集阳性样本与阴性样本按不同比例混合,采用本试剂盒及市售参比试剂盒分别检测混合样本的SARS-CoV-2,比较不同试剂盒检测不同靶标的检出浓度及扩增Ct值.结果 本试剂盒阳性符合率、阴性符合率及特异性均为100％,灵敏度为1×103 copies/mL;不同试剂盒对混合样本中不同靶基因的检出浓度不同,本试剂盒对ORF1ab靶基因的检出限为混合比例1/20,灵敏度高于参比试剂盒(1/10),且检测相同浓度模板的扩增Ct值低于参比试剂盒(P<0.05).结论 本试剂盒ORF1ab靶基因检测灵敏度高,在SARS-CoV-2核酸多样本混合检测中更具优势,适用于大规模人群筛查.
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