亚砷酸钠致人胚肺成纤维细胞损伤中自噬和凋亡的关系

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[背景]砷可导致细胞损伤,引起细胞自噬和凋亡,而细胞自噬与凋亡之间目前没有明确界限,二者关系目前尚不明确。[目的]探讨亚砷酸钠致人胚肺成纤维细胞(HELF)损伤中细胞自噬与凋亡的关系。[方法 ]HELF细胞株培养3 d后传代,随机分为对照组、亚砷酸钠处理组(亚砷酸钠浓度分别为5、10、20μmol/L)、自噬抑制组(20μmol/L NaAsO2+5 mmol/L 3-甲基腺嘌呤)、凋亡抑制组(20μmol/L NaAsO2+20μmol/L Caspase抑制剂z-VAD-FMK),染毒48 h后,MTT实验检测细胞存活率,倒置显微镜观察细胞形态学改变。提取细胞上清液、蛋白,ELISA法测定上清液中白介素(IL)-1β、IL-6、干扰素受体(IFN)-α含量。Western blot检测自噬相关蛋白p62和LC3的表达水平。Caspase试剂盒检测凋亡相关蛋白caspase3/7。[结果 ]各组细胞存活率在染毒12、24、48 h后均低于对照组(P <0.05)。随着染毒浓度增加细胞形态学改变,由紧密的梭形逐渐变为松散的圆形。10、20μmol/L砷染毒组HELF细胞上清液中IL-1β表达量升高(P <0.05);各砷染毒组细胞培养上清液中促炎因子IL-6、IFN-α表达量高于对照组(P <0.05);与20μmol/L亚砷酸钠染毒组相比,自噬抑制组呈现促炎因子表达量升高的趋势,凋亡抑制组呈现降低的趋势。与对照组相比,砷染毒组细胞中LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ蛋白表达量呈升高的趋势,p62蛋白的表达量呈降低的趋势;与20μmol/L亚砷酸钠染毒组相比,自噬抑制组细胞中LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ蛋白表达量降低(P <0.05),p62蛋白表达量呈升高的趋势;凋亡抑制组细胞中LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ蛋白表达水平呈升高趋势,p62蛋白的表达水平呈降低趋势。随着染毒浓度增加,与对照组相比,10、20μmol/L砷暴露组凋亡相关蛋白caspase3/7表达量增多(P <0.05);与20μmol/L亚砷酸钠染毒组相比,自噬抑制组caspase3/7表达量升高(P <0.05),凋亡抑制组表达量降低(P <0.05)。[结论 ]亚砷酸钠染毒后可引起HELF发生炎症反应、细胞自噬和凋亡,且细胞自噬与凋亡之间可能存在一定的拮抗关系。
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