观察肾母细胞瘤(WT)患儿外周血NK细胞经IL-2、IL-15扩增后对肾母细胞瘤SK-NEP-1的杀伤作用。
方法以8例WT患儿作为病例组,8例健康体检儿童作为对照组。采集每例外周血4 ml,按Ficoll法分离外周血单个核细胞(PBMC),流式细胞仪检测、分选两组PBMC中CD3-CD16+CD56+NK细胞;另采集病例组和对照组外周血4 ml,分离PBMC后,分两组进行培养[IL-2(100 U/ml)培养组、IL-2(100 U/ml)联合IL-15(10 ng/ml)培养组],流式细胞仪检测、分选培养后CD3-CD16+CD56+NK细胞。CCK8法检测在不同效靶比(E∶T分别为5∶1、10∶1、20∶1)(效应细胞:NK细胞;靶细胞:SK-NEP-1)情况下,WT患儿外周血NK细胞经IL-2、IL-15扩增后对SK-NEP-1细胞的杀伤作用。western blot检测培养前、IL-2培养组、IL-2联合IL-15组CD3-、CD16+、CD56+、NK细胞中TNF-α及TNF-β表达情况。
结果病例组和对照组采用IL-2联合IL-15扩增后的NK细胞比例分别增加[(7.3±2.4)%比(21.2±3.2)%],[(4.5±1.6)%比(10.1±3.4)%];数量分别增多(70.60±22.5),(30.12±33.16)倍,(P<0.05)。E∶T为10∶1、20∶1时,与单用IL-2扩增比较,IL-2联合IL-15扩增组的NK细胞对肾母细胞瘤细胞的杀伤作用均增强[(16.3±2.1)比(10.5±1.6)]、[(23.9±3.2)比(13.7±2.5)],(P<0.05)。病例组患儿外周血CD3-CD16+CD56+NK细胞采用IL-2联合IL-15培养后TNF-α和TNF-β的表达量,较IL-2组、培养前,均显著增加(P<0.05)。
结论IL-2联合IL-15能够提高患儿外周血NK细胞的比例及数量,增加其分泌TNF的能力,从而提高其对肿瘤的杀伤作用。