【摘 要】
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MYC2转录因子属于bHLH转录因子家族中重要的一员,它是植物茉莉酸（JA）信号途径中的核心调控元件之一,但在白木香中研究甚少。本实验以白木香叶片中分离的总RNA为模板,通过RT-PCR
【机 构】
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中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所; 江西中医药大学基础医学院转化医学中心;
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(81173481,31100220,31000136);协和学者特聘教授(医科人发【2012】282号);科技部国家创新人才计划重点领域创新团队(2013);中组部“万人计划”(2014)
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MYC2转录因子属于bHLH转录因子家族中重要的一员,它是植物茉莉酸（JA）信号途径中的核心调控元件之一,但在白木香中研究甚少。本实验以白木香叶片中分离的总RNA为模板,通过RT-PCR方法获得AsMYC2基因的编码区（CDS）全长,利用基因重组技术构建pGEX-4T-1-AsMYC2原核表达载体,并进行酶切和测序鉴定,将鉴定正确的克隆转化大肠杆菌BL21（DE3）,在37℃下0.1 mmol·L-1异丙基硫代β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导4 h,AsMYC2蛋白的表达量最高,且主要为可溶性蛋白。利用谷胱甘肽亲和介质进行融合蛋白的纯化,最后应用SDS-PAGE电泳和Western blotting鉴定融合蛋白。结果表明,成功构建了pGEX-4T-1-AsMYC2原核表达载体,诱导了GST-AsMYC2（谷胱甘肽巯基转移酶-AsMYC2）融合蛋白的表达并进行了蛋白的纯化。高质量的GST-AsMYC2融合蛋白的获得,为多克隆抗体的制备提供材料基础,为筛选其互作蛋白因子和研究基因功能奠定基础。利用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术对该基因进行组织表达特异性分析,结果显示AsMYC2基因在沉香形成的主要部位根和茎中的表达量最高,在叶中的表达量最低;该结果提示该基因可能与白木香中沉香的形成有关。
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