探讨Toll样受体4（TLR4）、髓质分化蛋白2（MD2）、基质相互作用蛋白1（STIM1）对细菌内毒素（LPS）诱导血管内皮细胞钙超载损伤及炎症反应的影响。
方法DMEM培养基培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）。①高保真反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测LPS刺激前及刺激后0.5、1、6、12、24 h的TLR4、MD2、核转录因子-κB（NF-κB）表达。②用psiSTIM、psiTLR转染细胞，激光共聚焦检测其对LPS刺激HUVEC钙内流的影响。③ psiTLR转染12 h后用LPS刺激6 h，免疫共沉淀法检测抗TLR4抗体沉淀细胞裂解液中MD-2、STIM1、NF-κB蛋白表达。④在LPS刺激HUVEC基础上，给予NF-κB抑制剂PDTC 0.1 mg/L或1 mg/L以及转染psiTLR表达载体1 h或12 h，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞上清液肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）水平，RT-PCR检测STIM1、NF-κB的mRNA表达。
结果① LPS刺激HUVEC后，上清液中TLR4、MD2、NF-κB的mRNA表达水平（2-ΔΔCt）逐渐升高，均于6 h达峰值，分别为23.52±2.88、17.43±3.43、18.13±2.99；与LPS刺激前（分别为7.02±2.81、5.19±3.22、8.11±1.42）比较差异均有统计学意义（均P<0.05）。② psiSTIM可显著抑制LPS诱导细胞外钙离子内流峰值（Peak[Ca2+]）显著升高（nmol/L：62.61±14.12比108.13±22.33，P<0.05）；psiTLR也可显著抑制LPS诱导Peak[Ca2+]显著升高（nmol/L：50.78±8.05比109.43±20.21，P<0.01）；而共同抑制TLR、STIM1表达则可使Peak[Ca2+]进一步降低（nmol/L：39.31±6.42比109.43±20.21，P<0.01）。③非LPS处理组免疫共沉淀法能检测到抗TLR4抗体沉淀细胞中MD2蛋白表达，LPS处理组MD2蛋白表达增强，psiTLR+LPS组MD2蛋白表达显著减弱；而3组均未检测到STIM1、NF-κB蛋白表达。④与LPS组比较，PDTC 1 mg/L组TNF-α水平显著降低（ng/L：0.60±0.24比1.77±0.66，P<0.01），PDTC 0.1 mg/L和1 mg/L组及psiTLR 12 h组IL-6水平显著降低（ng/L：232.10±63.54、134.32±37.23、284.23±56.14比510.22±89.23，均P<0.05），PDTC 1 mg/L组和psiTLR 12 h组NF-κB、STIM1的mRNA表达水平均明显下降〔NF-κB mRNA（2-ΔΔCt）：17.22±2.35、13.24±3.54比30.16±2.06，STIM1 mRNA（2-ΔΔCt）：12.57±2.43、12.21±2.46比25.12±2.02，均P<0.05〕。
结论TLR4、MD2、NF-κB信号及STIM1可调节LPS刺激HUVEC细胞Ca2+内流及炎性介质水平；下调TLR4、NF-κB、STIM1能有效抑制LPS诱导血管内皮细胞钙超载损伤及炎症反应。