【摘 要】
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目的 研究高压氧预处理对类缺血神经元细胞外信号调节激酶(ERK)和死亡相关蛋白激酶1(DAPK1)的影响. 方法(1)体外实验部分:将培养的小鼠神经元分为5组,即对照组、类缺血组、高
【机 构】
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广西中医药大学第一附属医院神经外科
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目的 研究高压氧预处理对类缺血神经元细胞外信号调节激酶(ERK)和死亡相关蛋白激酶1(DAPK1)的影响. 方法(1)体外实验部分:将培养的小鼠神经元分为5组,即对照组、类缺血组、高压氧预处理组、空质粒组、ERK过表达组.对照组不做任何处理,类缺血组细胞经95％NO2+5％ CO2混合气体处理30 min,高压氧预处理组细胞预先经98％O2+2％CO2的混合气体处理2h后同类缺血组细胞处理,空载质粒组转染p3XFlag-CMV空质粒,ERK过表达质粒组细胞转染p3XFlag-CMV-ERK质粒.噻唑蓝(MTT)法检测不同时间点前3组细胞的生长情况,Western blotting法检测前3组细胞中磷酸化的细胞外信号调节激酶(p-ERK)的表达,以及对照组、空质粒组、ERK过表达组细胞中活化caspase-3蛋白及DAPK1的表达.同时采用免疫共沉淀的方法检测前3组细胞中ERK与DAPK1分子的相互作用.(2)体内实验部分:将BALB/c小鼠分为对照组、类缺血组和高压氧预处理组,每组15只.采用免疫共沉淀的方法检测小鼠海马区神经元中ERK与DAPK1分子复合体的表达情况. 结果 细胞分组后24h、48 h、72 h及96h,对照组、类缺血组、高压氧预处理组细胞存活率差异均有统计学意义(P＜0.05),高压氧预处理可以显著抑制类缺血处理引起的细胞存活率的下降.同时3组细胞内p-ERK表达水平差异亦有统计学意义(P＜0.05),高压氧预处理可以显著抑制类缺血处理引起的p-ERK的升高.此外,过表达ERK基因能促进细胞中活化caspase-3的表达,而高压氧预处理可以降低ERK与DAPK1的相互作用. 结论 高压氧预处理可通过抑制ERK的活化及其与DAPK1相互作用,阻断细胞凋亡的激活,从而诱导细胞缺血耐受.
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