结核分支杆菌HSP70原核表达载体的构建和表达及蛋白纯化

来源 :吉林大学学报:医学版 | 被引量 : 0次 | 上传用户:cklingdian
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目的:构建结核分支杆菌HSP70原核表达载体并诱导其表达和纯化及鉴定目的蛋白。方法:利用PCR技术从牛型结核分支杆菌基因组中扩增出MtbHSP70DNA序列,构建重组质粒pGEM—MtbHSP70,经酶切、PCR和测序鉴定后,将MtbHSP70基因亚克隆到原核表达质粒PQE30,构建重组表达质粒PQE30-MtbHSP70,在大肠杆菌M15中诱导表达。用镍凝胶亲和层析的方法纯化目的蛋白,Westernblotting杂交鉴定纯化蛋白。结果:经测序证实,获得的目的基因与GenBank中公布的结核杆菌MtbH
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