【摘 要】
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目的 研究干扰mTOR对人类疱疹病毒8(HHV-8)感染的神经细胞SH-SY5Y的增殖和迁移能力的影响.方法 通过Western blot实验和qRT-PCR法验证HHV-8感染的SH-SY5Y神经细胞的mTOR表达水平.采用Lipofectamine 2000分别将si-mTOR与si-NC转染进KSHV感染的SH-SY5Y细胞中,采用Western blot和qRT-PCR技术检测转染效率;qRT-PCR检测HHV-8病毒相关因子LANA、RTA、K8.1的mRNA表达水平;采用CCK-8法和划痕实验
【机 构】
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石河子大学医学院生物化学教研室/新疆地方与民族高发病教育部重点实验室,新疆石河子832002
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目的 研究干扰mTOR对人类疱疹病毒8(HHV-8)感染的神经细胞SH-SY5Y的增殖和迁移能力的影响.方法 通过Western blot实验和qRT-PCR法验证HHV-8感染的SH-SY5Y神经细胞的mTOR表达水平.采用Lipofectamine 2000分别将si-mTOR与si-NC转染进KSHV感染的SH-SY5Y细胞中,采用Western blot和qRT-PCR技术检测转染效率;qRT-PCR检测HHV-8病毒相关因子LANA、RTA、K8.1的mRNA表达水平;采用CCK-8法和划痕实验检测细胞增殖和迁移能力;利用PI染色结合流式细胞术检测细胞周期;采用Western blot检测周期相关蛋白cyclin D1和p27的表达.结果 Western blot和qRT-PCR结果显示HHV-8感染的SH-SY5Y细胞中mTOR的表达水平高于SH-SY5Y细胞(P＜0.05).在干扰mTOR的HHV-8感染的SH-SY5Y细胞中,HHV-8病毒相关因子LANA、RTA、K8.1的表达水平均降低(P＜0.05).CCK-8和划痕实验结果表明干扰mTOR组细胞增殖、迁移能力低于对照组(P＜0.05).流式细胞术结果提示干扰mTOR组的细胞周期阻滞在G0/G1期(P＜0.05).Western blot结果显示cyclin D1表达水平降低,p27表达水平升高(P＜0.05).结论 干扰mTOR能够降低HHV-8感染的SH-SY5Y细胞的增殖和迁移能力,并将其细胞周期阻滞在G0/G1期,针对mTOR的靶向调控在治疗HHV-8感染引起的神经系统疾病有一定的作用.
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