论文部分内容阅读
目的制备胃癌多药耐药相关性单克隆抗体（ｍＡｂ），并以该抗体筛选肿瘤耐药细胞表位文库，以获得肿瘤耐药相关的新基因片段．方法采用杂交瘤技术，以胃癌耐药细胞株ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ为免疫原制备胃癌多药耐药相关性，ｍＡｂＭＧｒ１，并以ＭＧｒ１作为探针对肿瘤耐药细胞表位文库反复进行筛选；对稳定阳性重组子所携带的ｃＤＮＡ片段进行正反向测序，并将测序结果输入ＧｅｎｅＢａｎｋ进行同源性分析；原位杂交与Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ检测阳性克隆在不同组织细胞中的表达．结果经过２１次融合获得了２６株培养上清能与ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ结合的杂交瘤克隆，经免疫组化和单克隆抗体逆转耐药实验发现其中一株ｍＡｂ在ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ膜表面及胞内的表达显著高于其相应的药物敏感细胞ＳＧＣ７９０１，并能部分逆转ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ对ＡＤＲ和５ＦＵ的耐药性．Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ表明该ｍＡｂ对应的抗原Ｍｒ８０００００～１１００００，与Ｐｇｐ和ＭＲＰ不同，该株ｍＡｂ被命名为ＭＧｒ１．以ＭＧｒ１筛选文库，获得了５个能与ＭＧｒ１抗体结合的携带阳性重组子的菌落，经反复筛选后，证实有一个稳定的阳性克隆；正反向测序结果表明该阳性ｃＤＮＡ片段长度为３１０ｂｐ?