脑药物转运载体—抗转铁蛋白受体单链抗体的克隆表达及鉴定

来源 :中国生物化学与分子生物学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zl168
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为构建特异性的脑药物转运载体,分段合成了抗大鼠转铁蛋白受体的单链抗体基因(Ox26-scfv).经重叠PCR拼接成完整片段,克隆入pUC19载体中,测序正确后克隆到大肠杆菌表达载体pET-15b/E.tag上.IPTG诱导,表达产物分子量为29 kD,约占菌体总蛋白量的40%.包涵体经6 mol/L盐酸胍变性后,过Sephacryl S-300 HR分子筛柱复性蛋白.免疫酶染色实验表明,该单链抗体能与转铁蛋白受体特异性结合,为建立以转铁蛋白受体为介导的血脑屏障转运载体打下了基础.
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