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【摘要】目的：建立藏药材山柳叶糖芥的质量标准体系。方法：采用显微鉴别法与薄层色谱法对样品进行鉴别。结果：制定了藏药材山柳叶糖芥的显微特征标准，建立了其薄层色谱定性检测方法。结论：两种方法简便、可行、操作性强，为该药材的质量控制提供了参考依据。
【关键词】山柳叶糖芥；显微鉴别；薄层色谱鉴别
【中图分类号】R2841【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2017）07-0008-02
【摘要】目的：完善2015年版《中国药典》蒲黄项下草蒲黄和蒲黄炭的质量标准。方法：收集整理草蒲黄和蒲黄炭现行标准，增订药典中仅来源处提到的草蒲黄的质量标准，增订了性状、显微鉴别、薄层鉴别、水分、总灰分和含量测定项目，同时增订蒲黄炭的总灰分、杂质项目。结果：草蒲黄增加的性状、显微鉴别、薄层鉴别、水分、总灰分、杂质和含量测定项目，蒲黄炭增加的杂质、总灰分等项目能有效反映草蒲黄与蒲黄炭的质量情况；草蒲黄薄层色谱中斑点清晰，专属性强；香蒲新苷和异鼠李素-3-O-新橙皮苷分别在 0048～0951μg（r=09999） 、0046～0920μg（r=09999） 范围内线性关系良好，平均回收率分别为 9906% （RSD为125%） 、9823%（ RSD为140%）。结论：修订后的标准准确有效，可用于草蒲黄与蒲黄炭的质量控制。
【关键词】草蒲黄；蒲黄炭；质量标准提高
【中图分类号】R2841【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2017）07-0010-05
Study on the Quality Standard of Pollen Typhae with Staminate Flower and Carbo of Typhae Pollen in Chinese Pharmacopoeia （2015 Edition）
LIN Chunyan1，2DONG Yuan2ZHANG Yunhua2LI Zhongqiong2ZHANG Wenjie2ZHOU Zhihong1*
1 Yunnan University of TCM， Kunming 650000， China； 2Yunnan Insitute for Food and Drug Control， Kunming 650000， China
Abstract：Objective To improve the quality standard of Pollen Typhae with staminate flower and Carbonized Typhae Pollen Methods the current standards of Pollen Typhae with staminate flower and Carbonized Typhae Pollen are collectedDescriptive Information，The micro-identification，TLC identification， the water inspection， the total ash inspection and HPLC determination of total contents of Typhaneoside and Isorhamnetin-3-O-neohespeidoside in Pollen Typhae with staminate flower were addedAt the same time， the total ash and impurity inspection in Carbonized Typhae Pollen were added Results These added items of Pollen Typhae with staminate flower and Carbonized Typhae Pollen can effectively reflect their quality situation The sports were fairly clear and visible in TLC of Pollen Typhae with staminate flower，The contents of Typhaneoside and Isorhamnetin-3-O-neohespeidoside showed a good linear relationship in the range of 0048 ～0951μg （r= 0 999 9） and 0046 ～0920μg（r=0 999 9），respectivelyThe average recoveries were 9906% with RSD of 1 25% and 9823% with RSD of 140%，respectively Conclusion The revised standard is accurate，effective and can be usd to control the quality of Pollen Typhae with staminate flower and Carbonized Typhae Pollen
Keywords：Pollen Typhae with Staminate Flower； Carbonized Typhae Pollen； Quality Standard Improvemen
蒲黃为香蒲科植物水烛香蒲Typha angustifolia L、东方香蒲Typha orientalis Presl或同属植物的干燥花粉。蒲黄性甘，平。归肝、心包经。具有止血，化瘀，通淋的功效[1]。其主要含有甾类成分、黄酮类成分、酸性成分等，其中黄酮类成分香蒲新苷和异鼠李素-3-O新橙皮苷为主要的质控指标[2]。文献报道[3]，蒲黄止血化瘀作用明显，对凝血过程有显著影响，同时蒲黄提取液能改善心血管系统微循环，降血脂，对动脉粥样硬化也有一定的改善作用。在临床上主要用于治疗心血管疾病，眼出血以及妇科疾病。 草蒲黄与蒲黄植物来源一致，同为中药蒲黄入药。有效成分基本相同[4]、药理作用、临床功效主治也基本一致。二者不同之处在于，蒲黄为纯花粉，而草蒲黄则为带有雄花的花粉，即花药、花丝和花粉的混合物[1，5]。草蒲黄虽收载于药典蒲黄项下，但无任何质量控制指标；收载于宁夏、甘肃等多个地方标准 [6-9]，但同样存在项目设置不全的问题，见表1。故对药典中草蒲黄质量标准进行增订研究，解决草蒲黄标准缺失的问题。
蒲黄炭为“净蒲黄照炒炭法（附录Ⅱ D）炒至棕褐色”的炮制品。在功效方面增强了蒲黄的止血作用，偏于凉血止血。蒲黄炭作为饮片收载于药典蒲黄项下，但与蒲黄药材相比检验项目较少，缺少杂质、灰分等质量控制关键性指标，所以对药典中蒲黄炭的质量标准进行研究增订。
1仪器与材料
11仪器Aglient 1260高效液相色谱仪， TB-215D电子分析天平。
12材料香蒲新苷（批号：111573-201405）、异鼠李素-3-O-新橙皮苷对照品（批号：111571-201205）购自中国药品生物制品检定所。乙腈、甲醇为色谱纯，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。
草蒲黄样品4批，蒲黄炭样品11批，均来自2015年药材及饮片国家评价性抽样。样品均由云南省食品药品监督检验研究院中药所张雯洁所长鉴定，为草蒲黄药材及蒲黄炭饮片，来源为香蒲科植物水烛香蒲Typha angustifolia L、东方香蒲Typha orientalis Presl或同属植物的干燥花粉。
2草蒲黄
21性状本品为花粉、花药及花丝的混合品，花粉占多数，呈黄色粉末，细腻，手捻有光滑感，易附于手指上。花药短线状，长02～03cm，棕黄色，具四棱，棱槽明显，顶端呈褐色至黑褐色，手捻易碎，有的花药已碎断。花丝丝状，不规则弯曲或缠绕成团，棕黄色，手捻易成团。气微，味淡[1，7]。
2 2显微鉴别取草蒲黄粉末，置显微镜下观察：本品粉末黄色。花粉粒类园形或椭圆形，直径17～29μm，表面有網状雕纹，周边轮廓线光滑，呈凸波状或齿轮状，具单孔，不甚明显，花药、花丝薄壁细胞中含有草酸钙针晶。花粉囊内壁细胞具螺旋状纹理[1， 7]。
2 3薄层色谱鉴别取本品2g，加80%乙醇50mL，冷浸24h，滤过，滤液蒸干，残渣加水5mL使溶解，滤过，滤液加水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次5mL，合并正丁醇液，蒸干，残渣加乙醇2mL使溶解作为供试品溶液。另取异鼠李素-3-O-新橙皮苷对照品、香蒲新苷对照品，加乙醇制成每1mL各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（2015版药典四部0502）试验吸取上述两种溶液各2μL，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以丙酮-水（1∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点[1，5，10]。见图2。
231点样量的考察考察对照品的不同点样量，点样量为1～3μL时都能取得较好的效果，4uL时已经有过载的现象，故样品点样量选择为2μL。
232检测限的考察当大于或者等于混合对照溶液（香蒲新苷浓度为01017 mg/mL，异鼠李素-3-O-新橙皮苷浓度为01052 mg/mL）浓度时，可见香蒲新苷和异鼠李素-3-O-新橙皮苷斑点。故定香蒲新苷检出限为01μg，异鼠李素-3-O-新橙皮苷检出限为02μg。
24水分据药典2015版通则0832第二法测定，结果见表3。4批草蒲黄水分平均值为80%。草蒲黄与蒲黄植物来源一致，水分限度可参照药典中蒲黄药材水分限度（不得过130%）制定，结果显示4批草蒲黄水分均在该限度范围内。故草蒲黄水分限度定为：不得过130%。
25总灰分据药典2015版通则2302测定，结果见表3。4批草蒲黄总灰分平均值为79%。草蒲黄与蒲黄植物来源一致，总灰分限度可参照药典中蒲黄药材总灰分限度（不得过100%）制定，结果显示4批草蒲黄总灰分均在该限度范围内。故草蒲黄总灰分限度定为：不得过100%。
26酸不溶性灰分据药典2015版通则2302测定，结果见表3。4批草蒲黄酸不溶性灰分平均值为14%。草蒲黄与蒲黄植物来源一致，酸不溶性灰分限度可参照药典中蒲黄药材酸不溶性灰分限度（不得过40%）制定，结果显示4批草蒲黄酸不溶性灰分均在该限度范围内。故草蒲黄酸不溶性灰分限度定为：不得过40%。
27含量测定
271色谱条件与系统适用性试验色谱柱为Agilent ZORBAX C18柱（46mm×250mm，5μm）；以乙腈-005%磷酸溶液（15∶85）为流动相，等度洗脱，洗脱时间为35min；检测波长为254nm。流速为10mL/min，柱温35℃；进样量5μL。理论板数按异鼠李素-3-O-新橙皮苷峰计算应不低于5000[1，7，10-11]。
272对照品溶液的制备取异鼠李素-3-O-新橙皮苷对照品、香蒲新苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL各含50μg的溶液，即得[8]。
273供试品溶液的制备取本品约05g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，称定重量，冷浸12h后加热回流1h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
274专属性试验精密吸取对照品溶液、供试品溶液，依法测定，结果表明香蒲新苷和异鼠李素-3-O-新橙皮苷对照品分离度良好，空白溶剂无干扰。见图3。
275线性关系考察精密称取香蒲新苷001226g，异鼠李素-3-O-新橙皮苷001234g。分别至50mL容量瓶，加甲醇溶解，并定容至刻度，摇匀，得储备液，浓度分别为香蒲新苷23784400μg/mL，异鼠李素-3-O-新橙皮苷23001760μg/mL。分别精密量取5mL至同一25mL容量瓶，加甲醇定容至刻度，摇匀，得混合对照品溶液，浓度为香蒲新苷4756880μg/mL，异鼠李素-3-O-新橙皮苷4600352μg/mL。分别精密吸取各对照品溶液1、4、8、10、20μL注入液相色谱仪，依法测定，以峰面积积分值Y为纵坐标，相应的对照品进样量X（μg） 为横坐标，绘制标准曲线。香蒲新苷回归方程为 y=15758x-25195（r=0 9999），在0048～0951μg范围内线性关系良好；异鼠李素-3-O-新橙皮苷的直线回归方程为y=20082x-24698 （r=0 999 9），在 0046～0920μg 范围内线性关系良好。 276精密度试验精密吸取对照品溶液，连续重复进样 6 次，依法测定，结果香蒲新苷的 RSD 为039% 、异鼠李素-3-O-新橙皮苷的 RSD 为 040%，表明本法进样精密度良好。
277稳定性试验精密吸取同一份供试品溶液（样品2），分别于0、6、12、18、24、30、36、42、48h进样，依法测定峰面积，结果香蒲新苷和异鼠李素-3-O-新橙皮苷峰面积的RSD 分别为 056%、016%，表明制备的供试品溶液在48h内稳定。
278重复性试验取同一批号的供试品（样品2）适量，按“273”项下方法制备 6 份供试液，依法测定并计算香蒲新苷和异鼠李素-3-O-新橙皮苷的总量，结果 6 份供试品的平均含量为058%，其RSD为057%，表明本法重复性良好。
279加样回收率试验取同一批已知含量的供试品（样品2） 6 份，精密称定，每份约025g，分别精密加入香蒲新苷对照品溶液（ 浓度为23784400μg/mL）27mL和异鼠李素-3-O-新橙皮苷（浓度为23001760μg/mL） 32mL，低温蒸干，按“273”项下方法制备供试品溶液，依法测定香蒲新苷和异鼠李素-3-O-新橙皮苷的含量并分别计算回收率，结果香蒲新苷的平均回收率为9906%，其RSD为 125%；异鼠李素-3-O-新橙皮苷的平均回收率为9825%，其RSD为140%。结果表明回收率良好。
2710样品测定取4批样品，按 “2 7 3”项下方法制备供试品溶液，依法测定，按外标法计算。另外，蒲黄花粉粒大小为17～29μm，能够通过九号筛，而其他植物组织粉碎后也较难通过九号筛。所以测定样品能通过9号筛的百分比能大概了解花粉在草蒲黄中所占比例。
对11批次蒲黄炭样品依据药典方法进行总灰分及杂质的测定，结果显示总灰分與杂质测定结果高的样品都为掺杂较多的样品。如图4，杂质检测结果高的样品多为掺入花丝、花药或其他未知植物组织的碎片，这些碎片一般较大难以通过七号筛。总灰分检测结果高的样品在显微镜下常见亮片状物质，疑似为无机物掺假，无机物在高温下无法炭化，导致总灰分较高。可见杂质和总灰分是蒲黄炭饮片质量控制的两个关键因素，必须进行控制，故增订了这两个项目。由于蒲黄炭的炮制过程并不会对灰分，杂质等项目产生很大影响，所以参考蒲黄药材在2015版药典中的限度，将限度值暂定为“杂质不得过100%，总灰分不得过100%”。
4讨论
草蒲黄为花粉、花药、花丝的混合品，故性状和显微鉴别项下应有对花药、花丝的描述。参考地方药材标准，增加了对花药、花丝的描述，考察样品情况，与之相符。
鉴于草蒲黄与蒲黄同来源，薄层色谱鉴别和含量测定的方法应该同样适用于草蒲黄，故采用，并对这两个方法进行详细的方法学验证，证明对于草蒲黄样品的适用性。
本研究考察了三根不同商品规格的同类填料色谱柱（Welch C18柱（46mm×250mm）和Agilent C18（46mm×150mm））测定同一批草蒲黄样品（样2），结果两种色谱柱的理论板数均大于10000，各主峰间的分离度良好，测得含量分别为0584%、0585%，其RSD为 015%，表明本色谱条件的耐用性良好。
由于草蒲黄为花粉、花丝和花药的混合物，草蒲黄杂质较蒲黄高属正常现象，同时4批草蒲黄样品杂质差异较大，抽自河南的样品杂质最高（达53%），但香蒲新苷和异鼠李素-3-O-新橙皮苷的含量与其他批次草蒲黄相比并不低，表明杂质不是草蒲黄质量控制的关键因素。故未对草蒲黄的杂质项进行控制。
[JP+1]药典中规定蒲黄含量测定结果为：“本品按干燥品计算，含异鼠李素-3-O-新橙皮苷（C28H32O16）和香蒲新苷（C34H42O20）的总量不得少于050%。”，表4结果显示，除1批次草蒲黄样品的含量为042%偏低外， 其余样品含量均高于05%。根据能通过9号筛的百分比，大略可知草蒲黄中所含花粉质量均大于50%，考虑到不同来源的草蒲黄的含量差异及测定误差，结合实测值，拟定草蒲黄按干燥品计算，含异鼠李素-3-O-新橙皮苷（C28H32O16）和香蒲新苷（C34H42O20）的总量不得少于025%。[JP]
参考文献
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京： 中国医药科技出版社，2015： 331-332.
[2] 李芳，陈佩东，丁安伟，等.蒲黄化学成分研究[J].中草药，2012，43（ 4） ： 153-155.
[3] 陈佩东.蒲黄饮片炮制工艺及质量标准规范化研究[D].南京：南京中医药大学，2007.
[4] 赵丽萍，许卉.野生植物资源香蒲的综合开发与利用[J].中国林副特产，2007，2（1）：80-81.
[5] 孙全峰，周建理，杨青山.市售蒲黄商品的品质考察与鉴别[J].安徽医药，2015，14（06）：656-657.
[6] 宁夏回族自治区卫生局.宁夏中药炮制规范[S].银川： 宁夏回族自治区卫生局，1997： 267.
[7] 甘肃省食品药品监督管理局.甘肃省中药材标准[S].兰州： 甘肃文化出版社，2008： 411.
[8] 上海市食品药品监督管理局. 上海市中药饮片炮制规范》[S].上海： 上海科学技术出版社，2008： 239.
[9] 河南省食品药品监督管理局.河南省中药饮片炮制规范[S].郑州：河南人民出版社2005：391.
[10]李维维，余红芳，佟立金，等.蒲黄和草蒲黄的质量分析[J].沈阳药科大学学报，2007，24（12）：768-772.
[11]王敏春，王云霞，王苑桃，等.市售草蒲黄的质量考察及质量控制标准的探讨[J].中草药，2015，41（1）：132-134. 藏药是我国传统药学的一个重要组成部分，在青藏高原地区有着广泛的应用基础和悠久的历史。[JP2]目前，许多藏药材质量标准停留在经验鉴别及简单的理化鉴别阶段，尤其是地方质量标准未能很好控制藏药材质量标准。藏药材山柳叶糖芥（藏文名：冈托巴）是《中华本草》藏药卷（2002）[1][JP]所收载的药材之一，为十字花科植物山柳菊叶糖芥Erysimum hieracifolium L的种子，具有清热、镇咳、解毒的功效，临床主要用于热症，肺病，肉食中毒、血热等。目前该药材质量控制方面仅有性状鉴别，没有现代分析技术，不能有效控制其质量。本研究采用显微鉴别法与薄层色谱鉴别法对该药材进行定性鉴别，并建立了藏药材山柳叶糖芥的质量标准体系。
1仪器与材料
11仪器FA2004B电子天平（上海精密科学仪器有限公司）；恒温水浴锅（上海科析实验仪器厂）；JP2FⅠ-Ⅱ型紫外分析仪（上海嘉明马科技有限公司）；RE-52A旋转蒸发器 （上海精科实验有限公司）；OLYMPUS-BX51高级荧光显微镜；TSView显微照相机。
12材料藏药材山柳叶糖芥的种子，采自西藏林芝鲁朗、米林、松多，经西藏自治区食品药品检验所阿萍主任药师鉴定为十字花科植物山柳菊叶糖芥Erysimum hieraci folium L的种子。洋地黄毒苷对照品（上海融禾医药科技发展有限公司），无水乙醇（批号：20060516，天津市博迪化工有限公司）；甲醇（批号：20060414，天津市博迪化工有限公司）；乙酸乙酯（批号：20061109，天津市德才工贸有限公司），硅胶G板（青岛高能达化工有限公司）。
2方法
21显微鉴别参照显微鉴别法（《中国药典》2005年版第一部附录II C）[2]项下的方法制片观察。
22薄层色谱鉴别
221供试品溶液的制备取本品粉末1g，用90%乙醇15mL，加热回流提取1h，提取液滤过滤，浓缩，加2mL甲醇溶解，作为供试品溶液。
222对照品溶液的制备精密称取洋地黄毒苷加甲醇制成03mg/mL的对照品溶液。
223薄层色谱法按照《中国药典》2005年版第一部附录Ⅵ B试验[2]，吸取上述两种溶液各10μL，分别点于同一以硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水（16∶1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%三氯化锑氯仿溶液进行显色，在100℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm） 下检视。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
3结果
31显微鉴别
311种子横切面显微鉴别本品种皮表皮细胞细胞壁多破碎，为一层黏液细胞，细胞类圆形或多角形。栅栏细胞一列，内壁及侧壁增厚，细胞常柱形，排列较整齐，栅栏细胞内侧为1列厚壁细胞。近内胚乳的外侧为2～3列薄壁细胞，细胞长圆形或类圆形。内胚乳细胞多角形，内含油滴。最内层为子叶细胞，类圆形，含脂肪油滴。见图1。
312粉末显微鉴别本品粉末黄棕色，略显油润。种皮栅栏细胞多见，表面观多角形，侧面观常长柱形。厚角细胞可见，细胞壁不均匀增厚，类圆形或多角形。胚乳细胞较多，内含深棕色物质及脂肪油滴。黄色脂肪油滴较多，圆形或类圆形。见图2。
32薄层色谱鉴别不同产地藏药材山柳叶糖芥平行条件下进行薄层色谱，结果如图3所示。
4讨论
藏藥材山柳叶糖芥的质量控制方面仅有性状鉴别，没有现代分析技术，不能有效控制其质量。本文采用显微鉴别法与薄层色谱鉴别法对该药材进行定性鉴别，并建立了藏药材山柳叶糖芥的质量标准体系。
按照《中国药典》2005年版第一部附录II C（显微鉴别法） [2]项下的制片观察，该方法简便、可行、操作性强，且由图1、图2结果显示其显微鉴别特征明显。
山柳叶糖芥含强心苷类，实验以洋地黄毒苷作为标准对照品。以乙酸乙酯-甲醇-水（16∶1∶1）为展开剂，置紫外灯（365nm）下观察供试品色谱，在与洋地黄毒苷苷对照品相应的位置上显相同的荧光斑点，说明本次建立薄层色谱鉴别方法简便、可行、操作性强。
参考文献
[1]中华本草编委会.中华本草（藏药卷）[M].上海：上海科学技术出版社，2002：66-67.
[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：化学工业出版社，2005.
（收稿日期：2017-07-23编辑：程鹏飞）
【关键词】山柳叶糖芥；显微鉴别；薄层色谱鉴别
【中图分类号】R2841【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2017）07-0008-02
【摘要】目的：完善2015年版《中国药典》蒲黄项下草蒲黄和蒲黄炭的质量标准。方法：收集整理草蒲黄和蒲黄炭现行标准，增订药典中仅来源处提到的草蒲黄的质量标准，增订了性状、显微鉴别、薄层鉴别、水分、总灰分和含量测定项目，同时增订蒲黄炭的总灰分、杂质项目。结果：草蒲黄增加的性状、显微鉴别、薄层鉴别、水分、总灰分、杂质和含量测定项目，蒲黄炭增加的杂质、总灰分等项目能有效反映草蒲黄与蒲黄炭的质量情况；草蒲黄薄层色谱中斑点清晰，专属性强；香蒲新苷和异鼠李素-3-O-新橙皮苷分别在 0048～0951μg（r=09999） 、0046～0920μg（r=09999） 范围内线性关系良好，平均回收率分别为 9906% （RSD为125%） 、9823%（ RSD为140%）。结论：修订后的标准准确有效，可用于草蒲黄与蒲黄炭的质量控制。
【关键词】草蒲黄；蒲黄炭；质量标准提高
【中图分类号】R2841【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2017）07-0010-05
Study on the Quality Standard of Pollen Typhae with Staminate Flower and Carbo of Typhae Pollen in Chinese Pharmacopoeia （2015 Edition）
LIN Chunyan1，2DONG Yuan2ZHANG Yunhua2LI Zhongqiong2ZHANG Wenjie2ZHOU Zhihong1*
1 Yunnan University of TCM， Kunming 650000， China； 2Yunnan Insitute for Food and Drug Control， Kunming 650000， China
Abstract：Objective To improve the quality standard of Pollen Typhae with staminate flower and Carbonized Typhae Pollen Methods the current standards of Pollen Typhae with staminate flower and Carbonized Typhae Pollen are collectedDescriptive Information，The micro-identification，TLC identification， the water inspection， the total ash inspection and HPLC determination of total contents of Typhaneoside and Isorhamnetin-3-O-neohespeidoside in Pollen Typhae with staminate flower were addedAt the same time， the total ash and impurity inspection in Carbonized Typhae Pollen were added Results These added items of Pollen Typhae with staminate flower and Carbonized Typhae Pollen can effectively reflect their quality situation The sports were fairly clear and visible in TLC of Pollen Typhae with staminate flower，The contents of Typhaneoside and Isorhamnetin-3-O-neohespeidoside showed a good linear relationship in the range of 0048 ～0951μg （r= 0 999 9） and 0046 ～0920μg（r=0 999 9），respectivelyThe average recoveries were 9906% with RSD of 1 25% and 9823% with RSD of 140%，respectively Conclusion The revised standard is accurate，effective and can be usd to control the quality of Pollen Typhae with staminate flower and Carbonized Typhae Pollen
Keywords：Pollen Typhae with Staminate Flower； Carbonized Typhae Pollen； Quality Standard Improvemen
蒲黃为香蒲科植物水烛香蒲Typha angustifolia L、东方香蒲Typha orientalis Presl或同属植物的干燥花粉。蒲黄性甘，平。归肝、心包经。具有止血，化瘀，通淋的功效[1]。其主要含有甾类成分、黄酮类成分、酸性成分等，其中黄酮类成分香蒲新苷和异鼠李素-3-O新橙皮苷为主要的质控指标[2]。文献报道[3]，蒲黄止血化瘀作用明显，对凝血过程有显著影响，同时蒲黄提取液能改善心血管系统微循环，降血脂，对动脉粥样硬化也有一定的改善作用。在临床上主要用于治疗心血管疾病，眼出血以及妇科疾病。 草蒲黄与蒲黄植物来源一致，同为中药蒲黄入药。有效成分基本相同[4]、药理作用、临床功效主治也基本一致。二者不同之处在于，蒲黄为纯花粉，而草蒲黄则为带有雄花的花粉，即花药、花丝和花粉的混合物[1，5]。草蒲黄虽收载于药典蒲黄项下，但无任何质量控制指标；收载于宁夏、甘肃等多个地方标准 [6-9]，但同样存在项目设置不全的问题，见表1。故对药典中草蒲黄质量标准进行增订研究，解决草蒲黄标准缺失的问题。
蒲黄炭为“净蒲黄照炒炭法（附录Ⅱ D）炒至棕褐色”的炮制品。在功效方面增强了蒲黄的止血作用，偏于凉血止血。蒲黄炭作为饮片收载于药典蒲黄项下，但与蒲黄药材相比检验项目较少，缺少杂质、灰分等质量控制关键性指标，所以对药典中蒲黄炭的质量标准进行研究增订。
1仪器与材料
11仪器Aglient 1260高效液相色谱仪， TB-215D电子分析天平。
12材料香蒲新苷（批号：111573-201405）、异鼠李素-3-O-新橙皮苷对照品（批号：111571-201205）购自中国药品生物制品检定所。乙腈、甲醇为色谱纯，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。
草蒲黄样品4批，蒲黄炭样品11批，均来自2015年药材及饮片国家评价性抽样。样品均由云南省食品药品监督检验研究院中药所张雯洁所长鉴定，为草蒲黄药材及蒲黄炭饮片，来源为香蒲科植物水烛香蒲Typha angustifolia L、东方香蒲Typha orientalis Presl或同属植物的干燥花粉。
2草蒲黄
21性状本品为花粉、花药及花丝的混合品，花粉占多数，呈黄色粉末，细腻，手捻有光滑感，易附于手指上。花药短线状，长02～03cm，棕黄色，具四棱，棱槽明显，顶端呈褐色至黑褐色，手捻易碎，有的花药已碎断。花丝丝状，不规则弯曲或缠绕成团，棕黄色，手捻易成团。气微，味淡[1，7]。
2 2显微鉴别取草蒲黄粉末，置显微镜下观察：本品粉末黄色。花粉粒类园形或椭圆形，直径17～29μm，表面有網状雕纹，周边轮廓线光滑，呈凸波状或齿轮状，具单孔，不甚明显，花药、花丝薄壁细胞中含有草酸钙针晶。花粉囊内壁细胞具螺旋状纹理[1， 7]。
2 3薄层色谱鉴别取本品2g，加80%乙醇50mL，冷浸24h，滤过，滤液蒸干，残渣加水5mL使溶解，滤过，滤液加水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次5mL，合并正丁醇液，蒸干，残渣加乙醇2mL使溶解作为供试品溶液。另取异鼠李素-3-O-新橙皮苷对照品、香蒲新苷对照品，加乙醇制成每1mL各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（2015版药典四部0502）试验吸取上述两种溶液各2μL，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以丙酮-水（1∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点[1，5，10]。见图2。
231点样量的考察考察对照品的不同点样量，点样量为1～3μL时都能取得较好的效果，4uL时已经有过载的现象，故样品点样量选择为2μL。
232检测限的考察当大于或者等于混合对照溶液（香蒲新苷浓度为01017 mg/mL，异鼠李素-3-O-新橙皮苷浓度为01052 mg/mL）浓度时，可见香蒲新苷和异鼠李素-3-O-新橙皮苷斑点。故定香蒲新苷检出限为01μg，异鼠李素-3-O-新橙皮苷检出限为02μg。
24水分据药典2015版通则0832第二法测定，结果见表3。4批草蒲黄水分平均值为80%。草蒲黄与蒲黄植物来源一致，水分限度可参照药典中蒲黄药材水分限度（不得过130%）制定，结果显示4批草蒲黄水分均在该限度范围内。故草蒲黄水分限度定为：不得过130%。
25总灰分据药典2015版通则2302测定，结果见表3。4批草蒲黄总灰分平均值为79%。草蒲黄与蒲黄植物来源一致，总灰分限度可参照药典中蒲黄药材总灰分限度（不得过100%）制定，结果显示4批草蒲黄总灰分均在该限度范围内。故草蒲黄总灰分限度定为：不得过100%。
26酸不溶性灰分据药典2015版通则2302测定，结果见表3。4批草蒲黄酸不溶性灰分平均值为14%。草蒲黄与蒲黄植物来源一致，酸不溶性灰分限度可参照药典中蒲黄药材酸不溶性灰分限度（不得过40%）制定，结果显示4批草蒲黄酸不溶性灰分均在该限度范围内。故草蒲黄酸不溶性灰分限度定为：不得过40%。
27含量测定
271色谱条件与系统适用性试验色谱柱为Agilent ZORBAX C18柱（46mm×250mm，5μm）；以乙腈-005%磷酸溶液（15∶85）为流动相，等度洗脱，洗脱时间为35min；检测波长为254nm。流速为10mL/min，柱温35℃；进样量5μL。理论板数按异鼠李素-3-O-新橙皮苷峰计算应不低于5000[1，7，10-11]。
272对照品溶液的制备取异鼠李素-3-O-新橙皮苷对照品、香蒲新苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL各含50μg的溶液，即得[8]。
273供试品溶液的制备取本品约05g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，称定重量，冷浸12h后加热回流1h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
274专属性试验精密吸取对照品溶液、供试品溶液，依法测定，结果表明香蒲新苷和异鼠李素-3-O-新橙皮苷对照品分离度良好，空白溶剂无干扰。见图3。
275线性关系考察精密称取香蒲新苷001226g，异鼠李素-3-O-新橙皮苷001234g。分别至50mL容量瓶，加甲醇溶解，并定容至刻度，摇匀，得储备液，浓度分别为香蒲新苷23784400μg/mL，异鼠李素-3-O-新橙皮苷23001760μg/mL。分别精密量取5mL至同一25mL容量瓶，加甲醇定容至刻度，摇匀，得混合对照品溶液，浓度为香蒲新苷4756880μg/mL，异鼠李素-3-O-新橙皮苷4600352μg/mL。分别精密吸取各对照品溶液1、4、8、10、20μL注入液相色谱仪，依法测定，以峰面积积分值Y为纵坐标，相应的对照品进样量X（μg） 为横坐标，绘制标准曲线。香蒲新苷回归方程为 y=15758x-25195（r=0 9999），在0048～0951μg范围内线性关系良好；异鼠李素-3-O-新橙皮苷的直线回归方程为y=20082x-24698 （r=0 999 9），在 0046～0920μg 范围内线性关系良好。 276精密度试验精密吸取对照品溶液，连续重复进样 6 次，依法测定，结果香蒲新苷的 RSD 为039% 、异鼠李素-3-O-新橙皮苷的 RSD 为 040%，表明本法进样精密度良好。
277稳定性试验精密吸取同一份供试品溶液（样品2），分别于0、6、12、18、24、30、36、42、48h进样，依法测定峰面积，结果香蒲新苷和异鼠李素-3-O-新橙皮苷峰面积的RSD 分别为 056%、016%，表明制备的供试品溶液在48h内稳定。
278重复性试验取同一批号的供试品（样品2）适量，按“273”项下方法制备 6 份供试液，依法测定并计算香蒲新苷和异鼠李素-3-O-新橙皮苷的总量，结果 6 份供试品的平均含量为058%，其RSD为057%，表明本法重复性良好。
279加样回收率试验取同一批已知含量的供试品（样品2） 6 份，精密称定，每份约025g，分别精密加入香蒲新苷对照品溶液（ 浓度为23784400μg/mL）27mL和异鼠李素-3-O-新橙皮苷（浓度为23001760μg/mL） 32mL，低温蒸干，按“273”项下方法制备供试品溶液，依法测定香蒲新苷和异鼠李素-3-O-新橙皮苷的含量并分别计算回收率，结果香蒲新苷的平均回收率为9906%，其RSD为 125%；异鼠李素-3-O-新橙皮苷的平均回收率为9825%，其RSD为140%。结果表明回收率良好。
2710样品测定取4批样品，按 “2 7 3”项下方法制备供试品溶液，依法测定，按外标法计算。另外，蒲黄花粉粒大小为17～29μm，能够通过九号筛，而其他植物组织粉碎后也较难通过九号筛。所以测定样品能通过9号筛的百分比能大概了解花粉在草蒲黄中所占比例。
对11批次蒲黄炭样品依据药典方法进行总灰分及杂质的测定，结果显示总灰分與杂质测定结果高的样品都为掺杂较多的样品。如图4，杂质检测结果高的样品多为掺入花丝、花药或其他未知植物组织的碎片，这些碎片一般较大难以通过七号筛。总灰分检测结果高的样品在显微镜下常见亮片状物质，疑似为无机物掺假，无机物在高温下无法炭化，导致总灰分较高。可见杂质和总灰分是蒲黄炭饮片质量控制的两个关键因素，必须进行控制，故增订了这两个项目。由于蒲黄炭的炮制过程并不会对灰分，杂质等项目产生很大影响，所以参考蒲黄药材在2015版药典中的限度，将限度值暂定为“杂质不得过100%，总灰分不得过100%”。
4讨论
草蒲黄为花粉、花药、花丝的混合品，故性状和显微鉴别项下应有对花药、花丝的描述。参考地方药材标准，增加了对花药、花丝的描述，考察样品情况，与之相符。
鉴于草蒲黄与蒲黄同来源，薄层色谱鉴别和含量测定的方法应该同样适用于草蒲黄，故采用，并对这两个方法进行详细的方法学验证，证明对于草蒲黄样品的适用性。
本研究考察了三根不同商品规格的同类填料色谱柱（Welch C18柱（46mm×250mm）和Agilent C18（46mm×150mm））测定同一批草蒲黄样品（样2），结果两种色谱柱的理论板数均大于10000，各主峰间的分离度良好，测得含量分别为0584%、0585%，其RSD为 015%，表明本色谱条件的耐用性良好。
由于草蒲黄为花粉、花丝和花药的混合物，草蒲黄杂质较蒲黄高属正常现象，同时4批草蒲黄样品杂质差异较大，抽自河南的样品杂质最高（达53%），但香蒲新苷和异鼠李素-3-O-新橙皮苷的含量与其他批次草蒲黄相比并不低，表明杂质不是草蒲黄质量控制的关键因素。故未对草蒲黄的杂质项进行控制。
[JP+1]药典中规定蒲黄含量测定结果为：“本品按干燥品计算，含异鼠李素-3-O-新橙皮苷（C28H32O16）和香蒲新苷（C34H42O20）的总量不得少于050%。”，表4结果显示，除1批次草蒲黄样品的含量为042%偏低外， 其余样品含量均高于05%。根据能通过9号筛的百分比，大略可知草蒲黄中所含花粉质量均大于50%，考虑到不同来源的草蒲黄的含量差异及测定误差，结合实测值，拟定草蒲黄按干燥品计算，含异鼠李素-3-O-新橙皮苷（C28H32O16）和香蒲新苷（C34H42O20）的总量不得少于025%。[JP]
参考文献
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京： 中国医药科技出版社，2015： 331-332.
[2] 李芳，陈佩东，丁安伟，等.蒲黄化学成分研究[J].中草药，2012，43（ 4） ： 153-155.
[3] 陈佩东.蒲黄饮片炮制工艺及质量标准规范化研究[D].南京：南京中医药大学，2007.
[4] 赵丽萍，许卉.野生植物资源香蒲的综合开发与利用[J].中国林副特产，2007，2（1）：80-81.
[5] 孙全峰，周建理，杨青山.市售蒲黄商品的品质考察与鉴别[J].安徽医药，2015，14（06）：656-657.
[6] 宁夏回族自治区卫生局.宁夏中药炮制规范[S].银川： 宁夏回族自治区卫生局，1997： 267.
[7] 甘肃省食品药品监督管理局.甘肃省中药材标准[S].兰州： 甘肃文化出版社，2008： 411.
[8] 上海市食品药品监督管理局. 上海市中药饮片炮制规范》[S].上海： 上海科学技术出版社，2008： 239.
[9] 河南省食品药品监督管理局.河南省中药饮片炮制规范[S].郑州：河南人民出版社2005：391.
[10]李维维，余红芳，佟立金，等.蒲黄和草蒲黄的质量分析[J].沈阳药科大学学报，2007，24（12）：768-772.
[11]王敏春，王云霞，王苑桃，等.市售草蒲黄的质量考察及质量控制标准的探讨[J].中草药，2015，41（1）：132-134. 藏药是我国传统药学的一个重要组成部分，在青藏高原地区有着广泛的应用基础和悠久的历史。[JP2]目前，许多藏药材质量标准停留在经验鉴别及简单的理化鉴别阶段，尤其是地方质量标准未能很好控制藏药材质量标准。藏药材山柳叶糖芥（藏文名：冈托巴）是《中华本草》藏药卷（2002）[1][JP]所收载的药材之一，为十字花科植物山柳菊叶糖芥Erysimum hieracifolium L的种子，具有清热、镇咳、解毒的功效，临床主要用于热症，肺病，肉食中毒、血热等。目前该药材质量控制方面仅有性状鉴别，没有现代分析技术，不能有效控制其质量。本研究采用显微鉴别法与薄层色谱鉴别法对该药材进行定性鉴别，并建立了藏药材山柳叶糖芥的质量标准体系。
1仪器与材料
11仪器FA2004B电子天平（上海精密科学仪器有限公司）；恒温水浴锅（上海科析实验仪器厂）；JP2FⅠ-Ⅱ型紫外分析仪（上海嘉明马科技有限公司）；RE-52A旋转蒸发器 （上海精科实验有限公司）；OLYMPUS-BX51高级荧光显微镜；TSView显微照相机。
12材料藏药材山柳叶糖芥的种子，采自西藏林芝鲁朗、米林、松多，经西藏自治区食品药品检验所阿萍主任药师鉴定为十字花科植物山柳菊叶糖芥Erysimum hieraci folium L的种子。洋地黄毒苷对照品（上海融禾医药科技发展有限公司），无水乙醇（批号：20060516，天津市博迪化工有限公司）；甲醇（批号：20060414，天津市博迪化工有限公司）；乙酸乙酯（批号：20061109，天津市德才工贸有限公司），硅胶G板（青岛高能达化工有限公司）。
2方法
21显微鉴别参照显微鉴别法（《中国药典》2005年版第一部附录II C）[2]项下的方法制片观察。
22薄层色谱鉴别
221供试品溶液的制备取本品粉末1g，用90%乙醇15mL，加热回流提取1h，提取液滤过滤，浓缩，加2mL甲醇溶解，作为供试品溶液。
222对照品溶液的制备精密称取洋地黄毒苷加甲醇制成03mg/mL的对照品溶液。
223薄层色谱法按照《中国药典》2005年版第一部附录Ⅵ B试验[2]，吸取上述两种溶液各10μL，分别点于同一以硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水（16∶1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%三氯化锑氯仿溶液进行显色，在100℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm） 下检视。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
3结果
31显微鉴别
311种子横切面显微鉴别本品种皮表皮细胞细胞壁多破碎，为一层黏液细胞，细胞类圆形或多角形。栅栏细胞一列，内壁及侧壁增厚，细胞常柱形，排列较整齐，栅栏细胞内侧为1列厚壁细胞。近内胚乳的外侧为2～3列薄壁细胞，细胞长圆形或类圆形。内胚乳细胞多角形，内含油滴。最内层为子叶细胞，类圆形，含脂肪油滴。见图1。
312粉末显微鉴别本品粉末黄棕色，略显油润。种皮栅栏细胞多见，表面观多角形，侧面观常长柱形。厚角细胞可见，细胞壁不均匀增厚，类圆形或多角形。胚乳细胞较多，内含深棕色物质及脂肪油滴。黄色脂肪油滴较多，圆形或类圆形。见图2。
32薄层色谱鉴别不同产地藏药材山柳叶糖芥平行条件下进行薄层色谱，结果如图3所示。
4讨论
藏藥材山柳叶糖芥的质量控制方面仅有性状鉴别，没有现代分析技术，不能有效控制其质量。本文采用显微鉴别法与薄层色谱鉴别法对该药材进行定性鉴别，并建立了藏药材山柳叶糖芥的质量标准体系。
按照《中国药典》2005年版第一部附录II C（显微鉴别法） [2]项下的制片观察，该方法简便、可行、操作性强，且由图1、图2结果显示其显微鉴别特征明显。
山柳叶糖芥含强心苷类，实验以洋地黄毒苷作为标准对照品。以乙酸乙酯-甲醇-水（16∶1∶1）为展开剂，置紫外灯（365nm）下观察供试品色谱，在与洋地黄毒苷苷对照品相应的位置上显相同的荧光斑点，说明本次建立薄层色谱鉴别方法简便、可行、操作性强。
参考文献
[1]中华本草编委会.中华本草（藏药卷）[M].上海：上海科学技术出版社，2002：66-67.
[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：化学工业出版社，2005.
（收稿日期：2017-07-23编辑：程鹏飞）