论文部分内容阅读
目的 构建猪MHCⅡ分子的反转录病毒表达载体,建立产生病毒颗粒的包装细胞株,体外转导小型猪骨髓细胞并观察目的基因的表达情况,为研究小型猪转导同种异体MHCⅡ分子对于肝脏移植特异性免疫耐受的诱导提供实验基础和实验材料.方法利用基因重组技术将目的基因SLA-DRBdd、SLA-DQAdd和SLA-DQBdd克隆到反转录病毒载体pLNCX2上,通过脂质体转染包装细胞AmphoPackTM-293细胞,从G418筛选阳性克隆细胞培养上清中获得了有感染性的病毒颗粒;并对体外培养的猪骨髓细胞进行了感染,采用Nothem杂交和逆转录-聚合酶链反应(RTPCR)等方法检测了目的基因在骨髓细胞中的表达.结果经过酶切和测序验证已成功构建了MHCⅡ分子的反转录病毒表达载体,在转染AmphoPackTM-293细胞后可以产生有感染性的重组病毒颗粒,稳定的CFM-GFG418抗性率为6%～11%,RT结果显示抗性细胞中有目的基因的RNA转录产物存在,而转染空载体的对照组没有.结论重组有目的基因的逆转录病毒载体pLNCX2经过包装细胞AmphoPackTM-293产生的病毒颗粒可以有效地将猪MHCⅡ分子转导入猪的骨髓细胞并获得长期稳定的表达。