【摘 要】
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目的:构建pp GalNacT-10基因真核表达载体.方法:采用PCR方法合成含有酶切位点(XbaⅠ、EcoRⅠ)的pp GalNacT-10 cDNA.构建pMD19T-GalNacT-10-ORF和pMD19T-GalNacT-10-antisens
【机 构】
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南方医科大学基因工程研究所,苏州卫生职业技术学院,华南基因组研究中心
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目的:构建pp GalNacT-10基因真核表达载体.方法:采用PCR方法合成含有酶切位点(XbaⅠ、EcoRⅠ)的pp GalNacT-10 cDNA.构建pMD19T-GalNacT-10-ORF和pMD19T-GalNacT-10-antisense,鉴定及测序证实cDNA片段大小和序列.双酶切目的载体pcDNA3.1后,与GalNacT-10-ORF和GalNacT-10-antisense片段进行连接,构建正义和反义真核表达载体pcDNA3.1-GalNacT-10-ORF和pcDNA3.1-GalNacT-10-antisense,将其分别转染293T细胞,Western blot法检测pp GalNacT-10蛋白的表达.结果:pcDNA3.1-GalNacT-10-ORF和pcDNA3.1-GalNacT-10-antisense包含大小、序列正确的pp GalNacT-10片段;pp GalNacT-10蛋白在转染pcDNA3.1-GalNacT-10-ORF的293T细胞中高表达,在转染pcDNA3.1-GalNacT-10-antisense的293T细胞中表达降低.结论:成功构建了pp GalNacT-10基因正义和反义真核表达载体.
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