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[摘要]目的：证明BAG-1过表达与紫杉醇耐药有关。方法：通过血清饥饿实验和DNAladder实验检测卵巢上皮性癌对环境和紫杉醇反应的差异;western=blot法检测紫杉醇孵育24H后SKOV-3细胞BAG。1，BCL-XL和凋亡相关蛋白的表达。结果：SKOV-3细胞对低营养环境或紫杉醇耐受能力较正常卵巢上皮细胞高;紫杉醇孵育24H后SKOV-3细胞BAG-1表达仍比卵巢上皮细胞高，BCL-2和BCL-XL仍有类似现象，但在所有浓度孵育下卵巢上皮细胞HOSEpiC和最高浓度孵育下的SKOV-3细胞未检测BCL-2表达，DNA损伤标记蛋白γH2AX表达在SKOV-3细胞中较卵巢上皮细胞低。结论：BAG-1在SKOV-3细胞中表达上调，其作用机制与BCL-xL有关。
[中图分类号]R737.31 [文献标识码]A [文章编号]2096-5249（2019）05-008-01
1背景
来源于卵巢组织的恶性肿瘤是世界七大癌症之一，每年新发病例中约有80%以上病例为Ⅲ期IV期，较早出现远处转移。近二十年，卵巢癌发病率虽有所下降，死亡率却是仍居高不下。随着卵巢癌肿瘤细胞减灭术广泛应用、紫杉醇等一线化疗药物的应用及分子生物学手段日新月异，I期患者生存率有了显著提高，五年生存率能达到90%左右。HI/IV期患者通常经过约两年时间治疗，多数病例出現复发或耐药，因此五年存活率仅有25-30%。多步骤、多因素、多种关键分子或信号通路所致，通过影响卵巢癌细胞周期调控、增殖、迁移和侵袭，促进卵巢癌的发生发展。紫杉醇的引入是治疗卵巢癌的重要里程碑。然而部分患者对紫杉醇反应较差，这引起科研工作者对紫杉醇作用机制的深入研究，以改善患者生存率。
2材料和方法
2.1细胞培养与分组
卵巢上皮细胞HOSEplC，人卵巢癌细胞株SKOV-3置于含10%新生牛血清的RPMI 1640培养液中常规（37℃，5%C02）培养。2-3.d传代1次。取对数生长期SKOV3卵巢癌细胞，卵巢上皮细胞HOSEplC用于本部分实验。
2.2细胞培养 人卵巢癌细胞株SKOV-3、卵巢上皮细胞HOSEpiC均购自于北京协和医院细胞库。
取对数生长期的SKOV3、HOSEplC细胞用于实验。
2.3血清饥饿实验 使用不同浓度血清（10%，8%，6%，4%，2%，0%）对SKOV-3和HOSEpiC分别培养72.h，并使用MTT法检测细胞活性。
结果：如图1所示，SKOV-3细胞在低浓度血清培养基中活性高于同浓度培养条件下的HOSEpiC。
2.4DNALadder检测凋亡 结果：如图2所示，（1）同浓度顺铂孵育后，HOSEplC细胞DNA断裂较SKOV-3明显;（2）HOSEplC和SKOV-3的DNA断裂情况有紫杉醇剂量依赖性;（3）HOSEpiC细胞在最低紫杉醇浓度（1uM）孵育下较最高浓度（10uM）孵育的SKOV-3仍然有更强的DNA断裂现象。
2.5顺铂作用后BAG-1与BCL-2蛋白家族表达 使用不同紫杉醇浓度孵育两株细胞24.h，Western=Blot法检测BAG-1、BCL-xL、BCL-2和磷酸化γH2AX表达水平。
3结果
如图3所示，（1）24.h顺铂孵育后SKOV-3细胞BAG-1表达较所有浓度顺铂孵育下的HOSEplC表达水平高，其中BAG-1M在HOSEplC。中表达量极低;最高浓度顺铂孵育后SKOV-3细胞的BAG-1表达较其他浓度有所降低。但仍比HOSEpiC细胞表达量高;（2）BCL-xL在SKOV-3细胞表达随顺铂浓度增加而表达增加，但在最高顺铂浓度组表达略有降低，BCL-xL蛋白在HOSEpiC细胞中随顺浓度增高略有降低;（3）在HOSEplC细胞中未检测到BCL-2蛋白表达，在SKOV-3细胞中BCL-2表达随顺铂浓度增加递减，在最高顺铂浓度10uM未被检测到;
（4）磷酸化γH2AX表达水平在HOSEpiC细胞中明显高于同浓度顺铂孵育的SKOV-3细胞。
4讨论
紫杉醇是各种癌症化学治疗的一线药物，近年来卵巢癌靶向治疗药物发展迅速但仍需联合紫杉醇治疗。紫杉醇耐药是影响HNSCC治疗疗效的最大障碍，本研究所选细胞的耐药性通过体外低剂量紫杉醇诱导产生，因此所选耐药细胞更能体现临床患者的实际情况，与其对应原发肿瘤细胞比较更有价值。
对于紫杉醇耐药机制已经有诸多研究并找到许多生物标记物，但是这些标记物并不是在所有癌症中表达，并且许多标记物在紫杉醇耐药中的作用显示出相互矛盾的数据。迫其原因可能是因为紫杉醇的作用机制与耐药机制是多层次、多因素的，癌症类型、分期、患者自身因素等导致不同的癌症信号通路被激活。在一个患者中可能有多种耐药机制激活，显然一个生物标记物对于癌症的研究信息是不足够。我们使用血清饥饿实验结合Westem Blot等传统实验技术得出BAG-1高表达可能是部分HNSCC患者产生顺铂耐药性的重要原因。
[中图分类号]R737.31 [文献标识码]A [文章编号]2096-5249（2019）05-008-01
1背景
来源于卵巢组织的恶性肿瘤是世界七大癌症之一，每年新发病例中约有80%以上病例为Ⅲ期IV期，较早出现远处转移。近二十年，卵巢癌发病率虽有所下降，死亡率却是仍居高不下。随着卵巢癌肿瘤细胞减灭术广泛应用、紫杉醇等一线化疗药物的应用及分子生物学手段日新月异，I期患者生存率有了显著提高，五年生存率能达到90%左右。HI/IV期患者通常经过约两年时间治疗，多数病例出現复发或耐药，因此五年存活率仅有25-30%。多步骤、多因素、多种关键分子或信号通路所致，通过影响卵巢癌细胞周期调控、增殖、迁移和侵袭，促进卵巢癌的发生发展。紫杉醇的引入是治疗卵巢癌的重要里程碑。然而部分患者对紫杉醇反应较差，这引起科研工作者对紫杉醇作用机制的深入研究，以改善患者生存率。
2材料和方法
2.1细胞培养与分组
卵巢上皮细胞HOSEplC，人卵巢癌细胞株SKOV-3置于含10%新生牛血清的RPMI 1640培养液中常规（37℃，5%C02）培养。2-3.d传代1次。取对数生长期SKOV3卵巢癌细胞，卵巢上皮细胞HOSEplC用于本部分实验。
2.2细胞培养 人卵巢癌细胞株SKOV-3、卵巢上皮细胞HOSEpiC均购自于北京协和医院细胞库。
取对数生长期的SKOV3、HOSEplC细胞用于实验。
2.3血清饥饿实验 使用不同浓度血清（10%，8%，6%，4%，2%，0%）对SKOV-3和HOSEpiC分别培养72.h，并使用MTT法检测细胞活性。
结果：如图1所示，SKOV-3细胞在低浓度血清培养基中活性高于同浓度培养条件下的HOSEpiC。
2.4DNALadder检测凋亡 结果：如图2所示，（1）同浓度顺铂孵育后，HOSEplC细胞DNA断裂较SKOV-3明显;（2）HOSEplC和SKOV-3的DNA断裂情况有紫杉醇剂量依赖性;（3）HOSEpiC细胞在最低紫杉醇浓度（1uM）孵育下较最高浓度（10uM）孵育的SKOV-3仍然有更强的DNA断裂现象。
2.5顺铂作用后BAG-1与BCL-2蛋白家族表达 使用不同紫杉醇浓度孵育两株细胞24.h，Western=Blot法检测BAG-1、BCL-xL、BCL-2和磷酸化γH2AX表达水平。
3结果
如图3所示，（1）24.h顺铂孵育后SKOV-3细胞BAG-1表达较所有浓度顺铂孵育下的HOSEplC表达水平高，其中BAG-1M在HOSEplC。中表达量极低;最高浓度顺铂孵育后SKOV-3细胞的BAG-1表达较其他浓度有所降低。但仍比HOSEpiC细胞表达量高;（2）BCL-xL在SKOV-3细胞表达随顺铂浓度增加而表达增加，但在最高顺铂浓度组表达略有降低，BCL-xL蛋白在HOSEpiC细胞中随顺浓度增高略有降低;（3）在HOSEplC细胞中未检测到BCL-2蛋白表达，在SKOV-3细胞中BCL-2表达随顺铂浓度增加递减，在最高顺铂浓度10uM未被检测到;
（4）磷酸化γH2AX表达水平在HOSEpiC细胞中明显高于同浓度顺铂孵育的SKOV-3细胞。
4讨论
紫杉醇是各种癌症化学治疗的一线药物，近年来卵巢癌靶向治疗药物发展迅速但仍需联合紫杉醇治疗。紫杉醇耐药是影响HNSCC治疗疗效的最大障碍，本研究所选细胞的耐药性通过体外低剂量紫杉醇诱导产生，因此所选耐药细胞更能体现临床患者的实际情况，与其对应原发肿瘤细胞比较更有价值。
对于紫杉醇耐药机制已经有诸多研究并找到许多生物标记物，但是这些标记物并不是在所有癌症中表达，并且许多标记物在紫杉醇耐药中的作用显示出相互矛盾的数据。迫其原因可能是因为紫杉醇的作用机制与耐药机制是多层次、多因素的，癌症类型、分期、患者自身因素等导致不同的癌症信号通路被激活。在一个患者中可能有多种耐药机制激活，显然一个生物标记物对于癌症的研究信息是不足够。我们使用血清饥饿实验结合Westem Blot等传统实验技术得出BAG-1高表达可能是部分HNSCC患者产生顺铂耐药性的重要原因。