岷江百合病程相关蛋白4基因及其启动子的克隆与分析

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为了揭示岷江百合(Lilium regale)抗枯萎病菌防卫反应的分子机制,从岷江百合转录组数据中挖掘了一个响应尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)侵染的病程相关蛋白(PR)4基因。通过RT-PCR和染色体步移扩增得到LrPR4的DNA序列及其启动子片段,并初步分析其功能。LrPR4包含一个长432 bp的ORF,编码143个氨基酸残基,具有保守的Barwin结构域,属于II类PR4。qPCR结果显示LrPR4在岷江百合的根、花和鳞片中均有表达,外源信号分子处理和尖孢镰刀菌侵染均诱导LrPR4的表达。LrPR4启动子片段长501 bp,具有MYB、MYC等转录因子结合位点、响应低温、干旱、光、生长素、水杨酸的顺式作用元件。将LrPR4启动子驱动的GUS基因转入烟草(Nicotiana tabacum)中表达,转基因烟草的GUS活性受植物激素茉莉酸甲酯和水杨酸以及病原真菌尖孢镰刀菌、交链格孢、厚垣镰刀菌的诱导。在大肠杆菌中表达并纯化的LrPR4重组蛋白对厚垣镰刀菌、尖孢镰刀菌的菌丝生长具有抑制作用。本研究为后续进一步研究岷江百合PR4蛋白的功能奠定了基础。
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