【摘 要】
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目的 探讨大鼠胰腺干细胞体外分离、纯化的实验条件及其定向分化潜能.方法 应用胰腺原位灌注V型胶原酶消化大鼠胰腺组织,100目滤网滤过,Ficoll 400浓度梯度离心法分离胰腺干
【机 构】
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青岛市立医院肝胆咦外科,济宁医学院附属医院急诊普外科
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目的 探讨大鼠胰腺干细胞体外分离、纯化的实验条件及其定向分化潜能.方法 应用胰腺原位灌注V型胶原酶消化大鼠胰腺组织,100目滤网滤过,Ficoll 400浓度梯度离心法分离胰腺干细胞,采用添加表皮生长因子(EGF)、成纤维细胞生长因子(bFGF)的培养基行体外培养.运用荧光免疫染色法检测细胞表面CK-19、Pdx-1、Nestin、Insulin和Glucagon蛋白,计算阳性细胞率.双硫腙(DTZ)染色鉴定诱导分化后的细胞,光电酶标记法ELISA检测胰岛素分泌功能.结果 本实验获取的胰腺干细胞,体外培养可稳定传代培养8代以上.细胞表面CK-19、Pdx-1和Nestin蛋白均呈阳性,阳性细胞率分别为(88.6±6.2)%、(84.6±8.6)%和(81.3±7.5)%.诱导分化后细胞经DTZ染色呈棕红色.在高糖刺激下,培养上清液中胰岛素含量增高.结论本法可获取高纯度、多数量的胰腺干细胞,在人工诱导下可定向分化为具有胰岛素分泌功能的胰岛样细胞团,为临床胰岛移植获得足量细胞来源提供实验基础.
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