探讨CD137-CD137配体（CD137L）信号通路是否通过P38调控小鼠血管平滑肌细胞（VSMC）钙化的形成。
方法C57雄性小鼠，8周龄，采用组织贴块法培养原代小鼠VSMC，取第3~8代细胞进行实验。将细胞分为4组，即对照组、CD137激动组（重组CD137L干预）、P38抑制组（CD137激动组干预基础上加P38抑制剂）和P38单独抑制组（P38抑制剂干预）。采用10 mmol/L β-甘油磷酸钠+10-8 mol/L地塞米松+10-7 mol/L胰岛素诱导细胞钙化。免疫荧光法检测VSMC α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和骨桥蛋白（OPN）的表达，Western blot法检测磷酸化P38（p-P38）、OPN、Runt相关转录因子-2（RUNX-2）蛋白表达，实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测钙化相关蛋白RUNX-2、OPN mRNA表达，微板法检测碱性磷酸酶（ALP）活性和钙离子浓度。进一步将细胞分为5组，即对照组、CD137激动组（重组CD137L干预）、P38抑制组（CD137激动组干预的基础上加P38抑制剂）、CD137抑制组（CD137激动组基础上加CD137抑制剂）和P38激动组（CD137抑制组的基础上加P38激动剂），通过Von Kossa染色和茜素红染色观察各组细胞的钙化程度。
结果（1）各组VSMC中α-SMA和OPN蛋白表达的免疫荧光检测结果：CD137激动组VSMC中α-SMA蛋白表达水平明显低于对照组（2.79±0.25比5.42±0.47，P<0.05），而OPN蛋白表达水平则明显高于对照组（4.91±0.23比1.63±0.26，P<0.05）。P38抑制组VSMC中α-SMA蛋白表达水平虽高于CD137激动组（4.48±0.27比2.79±0.25，P<0.05），但仍明显低于对照组（4.48±0.27比5.42±0.47，P<0.05）；OPN蛋白表达水平虽低于CD137激动组（2.66±0.15比4.91±0.23，P<0.05），但仍高于对照组（2.66±0.15比1.63±0.26，P<0.05）。而P38单独抑制组α-SMA和OPN蛋白表达水平与对照组比较差异则均无统计学意义（P均>0.05）。（2）各组VSMC中p-P38、OPN、RUNX-2蛋白表达的Western blot检测结果：CD137激动组VSMC中p-P38、OPN和RUNX-2蛋白表达水平均高于对照组（分别为4.15±0.24比3.48±0.26，2.43±0.21比1.53±0.08，和3.20±0.23比1.13±0.10，P均<0.05），P38抑制组VSMC中p-P38、OPN和RUNX-2蛋白表达水平均低于CD137激动组（分别为1.16±0.12比4.15±0.24，0.50±0.02比2.43±0.21，和1.74±0.14比3.20±0.23，P均<0.05），而P38单独抑制组VSMC中p-P38、OPN和RUNX-2蛋白表达水平与对照组比较差异则均无统计学意义（P均>0.05）。（3）各组VSMC中OPN、RUNX-2 mRNA表达的RT-PCR检测结果：CD137激动组VSMC中OPN、RUNX-2的mRNA表达水平均明显高于对照组（分别为1.51±0.34比1，2.67±0.19比1，P均<0.05），P38抑制组VSMC中OPN、RUNX-2的mRNA表达水平均明显低于对照组（分别为0.33±0.14比1，0.45±0.03比1，P均<0.05），而P38单独抑制组VSMC中OPN、RUNX-2的mRNA表达水平与对照组比较差异则均无统计学意义（P均>0.05）。（4）各组VSMC中ALP活性和钙离子浓度的检测结果：CD137激动组VSMC中ALP活性和钙离子浓度均高于对照组[分别为（2.40±0.25）金氏单位/gprot比（1.40±0.21）金氏单位/gprot，（5.51±0.33）mmol/gprot比（3.15±0.31）mmol/gprot，P均<0.05]，而P38抑制组VSMC中ALP活性和钙离子浓度均低于CD137激动组[分别为（1.99±0.07）金氏单位/gprot比（2.40±0.25）金氏单位/gprot，（3.74±0.20）mmol/gprot比（5.51±0.33）mmol/gprot，P均<0.05]，而P38单独抑制组ALP活性和钙离子浓度与对照组比较差异均无统计学意义[（1.60±0.25）金氏单位/gprot比（1.40±0.21）金氏单位/gprot，（2.66±0.28）mmol/gprot比（3.15±0.31）mmol/gprot，P均>0.05]。Von Kossa和茜素红染色结果显示，与对照组比较，CD137激动组VSMC钙化程度较重，而P38抑制组钙化程度较轻。CD137抑制组VSMC钙化程度较CD137激动组轻，而P38激动组钙化程度则较CD137抑制组和对照组重。
结论CD137-CD137L信号通路可能通过P38调控小鼠VSMC钙化形成。