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目的
制备鼠抗人B7-H6单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定。
方法构建B7-H6真核表达系统，转染小鼠成纤维细胞NIH/3T3，潮霉素筛选获得稳转细胞株2H8，腹腔免疫BALB/c小鼠，采用杂交瘤技术进行细胞融合，用流式细胞术筛选阳性克隆，有限稀释法进行克隆化培养阳性杂交并鉴定其亚型。杂交瘤细胞株腹腔注射小鼠获得腹水型抗体，经G-sepharose柱采用亲和层析法对小鼠腹水中的抗体进行纯化，应用蛋白印迹和流式细胞术分析抗体的特异性。
结果细胞融合后筛选培养出2株能够稳定分泌抗B7-H6单克隆抗体的杂交瘤细胞株2D12和9D1，单抗亚类鉴定均属于IgG2a，轻链为κ型。蛋白质印迹和流式细胞术证明其与B7-H6均有特异性反应。
结论成功制备出高特异性抗人B7-H6单克隆抗体。