【摘 要】
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目的 通过pET32a(+)原核表达载体,表达重组人叉头框蛋白L2(human forkhead box L2,FOXL2l),并且进行纯化和鉴定.方法 从正常人血液中提取基因组DNA,利用PCR扩增FOXL2l目的 基
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目的 通过pET32a(+)原核表达载体,表达重组人叉头框蛋白L2(human forkhead box L2,FOXL2l),并且进行纯化和鉴定.方法 从正常人血液中提取基因组DNA,利用PCR扩增FOXL2l目的 基因片段,构建FOXL2l原核表达重组质粒[pET32a(+)-FOXL2l]并转化E.coli的BL21(DE3)菌株,IPTG诱导重组蛋白表达,经His TrapTM FF亲和层析柱纯化,再通过SDS-PAGE和Western印迹鉴定.结果 成功克隆到大小为1 131 bp的人源FOXL2l基因片段并准确插入表达载体pET32a(+),0.1 mmol/L IPTG诱导转化菌8 h可表达大量的FOXL2l蛋白,并可经His TrapTM FF柱亲和层析得到高度纯化.结论 成功获得纯化的66 kD重组人FOXL2l蛋白,为后续进行FOXL2l蛋白的功能研究奠定了基础.
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