从呋喃它酮代谢物AMOZ衍生物单克隆抗体杂交瘤细胞中克隆抗体V_H和V_L基因，通过(G₄S)₃连接肽采用重叠延伸PCR技术构建单链抗体基因，pET-22b（+）表达载体进行表达，Ni亲和柱进行纯化，制备得到抗AMOZ衍生物单链抗体，采用棋盘滴定试验优化包被原包被浓度和单链抗体稀释度，建立基于此单链抗体的AMOZ残留间接竞争酶联免疫分析方法并对方法进行评价。结果表明：最佳包被抗原浓度和单链抗体稀释度分别为0.0625 μg/mL和20倍；建立的间接竞争酶联免疫分析方法半抑制浓度为8.65 μg/L，线性检测范围2.90～53.28 μg/L，检测限1.48 μg/L；除与原药呋喃它酮有交叉反应外，此单链抗体与其它硝基呋喃类抗生素及其代谢物交叉反应率均小于0.1%，虾肉样品添加回收率为74.3%～86.6%；用高效液相色谱-串联质谱法对免疫测定结果进行确证实验，两种方法相关性良好(R²=0.9992)，说明本文建立的间接竞争酶联免疫分析方法可用于虾类等水产品中AMOZ残留的快速筛查。