【摘 要】
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目的 应用Loxp-Cre系统构建去泛素化酶Otud4基因敲除小鼠.方法 利用Loxp-Cre系统原理,将Otud4基因中的4号外显子选为打靶序列,将两个LoxP位点分别设在E4的两端,经打靶载体转
【机 构】
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安徽医科大学研究生院,合肥 230032;军事科学院军事医学研究院辐射医学研究所,北京 100850;军事科学院军事医学研究院生命组学研究所,北京 100850;军事科学院军事医学研究院生命组学研究所
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目的 应用Loxp-Cre系统构建去泛素化酶Otud4基因敲除小鼠.方法 利用Loxp-Cre系统原理,将Otud4基因中的4号外显子选为打靶序列,将两个LoxP位点分别设在E4的两端,经打靶载体转入ES细胞、阳性克隆筛选、囊胚注射等过程,得到嵌合体小鼠,再将嵌合体小鼠与C57BL/6小鼠交配繁育,最终得到杂合子小鼠并进行自交得到新生F1代小鼠.然后利用PCR进行基因型鉴定,使用免疫印迹(WB)技术从蛋白水平检测OTUD4在各组织器官中的表达,以明确基因敲除小鼠是否构建成功.对各基因型小鼠进行数量统计分析明确其是否符合孟德尔遗传定律,是否具有胚胎致死表型.解剖小鼠观察主要组织器官有无明显发育异常,利用HE染色观察是否具有自发的病理改变.通过葡萄糖耐受实验分析基因敲除小鼠是否具有代谢异常等.结果 基因型鉴定和WB检测结果显示Otud4基因敲除小鼠模型成功建立.杂合子小鼠自交后各基因型比例符合孟德尔定律,提示Otud4基因敲除小鼠非胚胎致死.各组织器官大小无显著性差异,HE染色并无异常,且Otud4基因敲除后不影响小鼠的血糖稳态.结论 应用Loxp-Cre系统成功构建了Otud4基因敲除小鼠,且小鼠正常出生,无任何胚胎发育缺陷,各器官无显著病理性变化,血糖代谢无异常.
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