【摘 要】
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目的:观察毛钩藤碱(HS)对H2O2诱导的大鼠心肌细胞氧化应激损伤的保护作用,并初步探讨其机制.方法:选取出生1～2 d的大鼠乳鼠提取原代心肌细胞作为研究对象,用400μmol/L浓度的H2O2刺激细胞,复制细胞氧化应激模型.将细胞分为4组:Control组、HS组、H2O2组、H2O2+HS组.采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测细胞活性,采用Tunel法检测细胞凋亡情况,采用免疫荧光法检测细胞形态结构,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测Bcl-2、Bax、Caspase 3、Clea
【机 构】
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湖北文理学院 基础医学院,湖北 襄阳 441053;温州医科大学 基础医学院,浙江 温州 325035;湖北文理学院 基础医学院,湖北 襄阳 441053;温州医科大学附属第一医院 心胸外科,浙江 温
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目的:观察毛钩藤碱(HS)对H2O2诱导的大鼠心肌细胞氧化应激损伤的保护作用,并初步探讨其机制.方法:选取出生1～2 d的大鼠乳鼠提取原代心肌细胞作为研究对象,用400μmol/L浓度的H2O2刺激细胞,复制细胞氧化应激模型.将细胞分为4组:Control组、HS组、H2O2组、H2O2+HS组.采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测细胞活性,采用Tunel法检测细胞凋亡情况,采用免疫荧光法检测细胞形态结构,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测Bcl-2、Bax、Caspase 3、Cleaved-caspase 3、Nrf2及HO-1的蛋白水平表达情况.结果:细胞活力检测结果发现,与Control组比,H2O2处理6、12、24 h,细胞活性均显著降低(P<0.01);与H2O2组比,H2O2+1μmol/L HS、H2O2+10μmol/L HS组细胞活力显著升高(P<0.01);与H2O2组比,H2O2+100μmol/L HS组细胞活力显著下降(P<0.01).细胞凋亡检测结果显示,与H2O2组比,H2O2+HS组细胞凋亡显著下降(P<0.05),肌节结构相对完整;与H2O2组比,H2O2+HS组细胞Bax/Bcl-2、Cleaved-caspase 3/Caspase 3蛋白比值下调(P<0.05),Nrf2、HO-1蛋白表达上调(P<0.05).结论:HS对H2O2诱导的大鼠心肌细胞线粒体凋亡有保护作用,其机制可能通过Nrf2/HO-1信号通路发挥作用.
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