【摘 要】
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目的探讨缺氧对人绒毛外滋养细胞微小RNA（microRNA，miRNA）–155表达的影响及其对滋养细胞迁移的影响。方法（1）采用100 μmol/L氯化钴（cobalt chloride，CoCl2）诱导HTR–8/SVneo细胞缺氧，实时定量聚合酶链反应技术检测miRNA–155的表达，蛋白质印迹技术检测JunB和FosB蛋白的表达，划痕实验评估细胞迁移能力。（2）采用SP600125和PDT
【机 构】
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210029,南京医科大学鼓楼临床医学院妇产科;南京大学医学院附属鼓楼医院妇产科;
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目的 探讨缺氧对人绒毛外滋养细胞微小RNA(microRNA,miRNA)-155表达的影响及其对滋养细胞迁移的影响. 方法 (1)采用100μmol/L氯化钴(cobalt chloride,CoCl2)诱导HTR-8/SVneo细胞缺氧,实时定量聚合酶链反应技术检测miRNA-155的表达,蛋白质印迹技术检测JunB和FosB蛋白的表达,划痕实验评估细胞迁移能力.(2)采用SP600125和PDTC分别抑制激活蛋白-1(active protein-1,AP-1)和/或核因子(nuclear factor)-κ B通路,实时定量聚合酶链反应技术检测miRNA-155的表达变化.(3)HTR-8/SVneo细胞瞬时转染pEGFP-miRNA-155、pEGFP-C1和pGL3-pro-cyclin D1 3UTR,荧光素酶报告基因系统检测miRNA-155对cyclin D1 3非编码区的调控.(4)HTR-8/SVneo细胞瞬时转染pEGFP-miRNA-155和/或pFLAG-CMV-cyclin D1以过表达miRNA-155和/或cyclin D1,划痕实验评估细胞迁移能力的改变.采用两独立样本t检验,方差分析及LSD检验进行统计学分析. 结果 (1) 100 μmol/L CoCl2培养HTR-8/SVneo细胞24和48 h,miRNA-155的相对表达量分别是0h的(1.40±0.28)倍(t=3.302,P＝0.030)和(1.74±0.14)倍(t=8.578,P=0.001),随CoC12(100μmol/L)作用于HTR-8/SVneo细胞的时间延长,JunB和FosB蛋白表达均升高.细胞迁移率在培养12、24和48 h较0μmol/L CoC12时下降,尤以48 h降低明显[(52.98±3.77)％与(64.68±3.92)％,t=5.259,P=0.00 0].(2)抑制AP-1亚组、抑制NF-κB亚组及同时抑制AP-1和NF-κB亚组miRNA-155的相对表达量分别降低至无抑制情况下的(50.45±3.53)％、(47.18±2.14)％和(66.79±3.92)％(t值分别为3.630、4.100和3.392,P值均＜0.05).(3)过表达miRNA-155亚组的cyclin D1 3非编码区荧光素酶活性较无过表达时降低(t=46.682,P=0.000).(4)过表达miRNA-155亚组的HTR-8/SVneo细胞迁移率较无过表达时明显降低[48 h,(33.31±6.19)％与(47.20±2.82)％,LSD检验,P＜0.05],而同时过表达miRNA-155和cyclin D1亚组的HTR-8/SVneo细胞迁移率较单纯过表达miRNA-155亚组明显升高[48 h,(43.04±1.44)％与(33.31±6.19)％,LSD检验,P=0.002]. 结论 缺氧通过激活HTR-8/SVneo细胞中AP-1和NF-κB通路而引起miRNA-155的表达升高,miRNA-155表达升高可以下调细胞周期蛋白cyclin D1,进而抑制滋养细胞迁移.
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