高浓度葡萄糖对人结肠癌上皮细胞Caco-2细胞胆固醇吸收的影响及机制研究

来源 :中华消化外科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:mmxxmm333
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的

探讨高浓度葡萄糖对人结肠癌上皮细胞Caco-2细胞胆固醇吸收的影响,探索其作用机制。

方法

采用实验研究方法。(1)CCK-8检测细胞增殖:采用CCK-8检测不同浓度(12.5、100.0、300.0、700.0、1 000.0、1 388.0 mmol/L)葡萄糖溶液作用于Caco-2细胞时,Caco-2细胞增殖率变化情况,确定葡萄糖溶液对Caco-2细胞半数抑制浓度,结合文献确定后续实验中葡萄糖溶液浓度梯度。(2)检测Caco-2细胞胆固醇吸收量:将Caco-2细胞分为胆固醇组、胆固醇+依折麦布(胆固醇抑制剂)组和空白对照组。胆固醇组:加入100 μmol/L胆固醇溶液和不同浓度(5.0、25.0、50.0 mmol/L)葡萄糖溶液。胆固醇+依折麦布组:加入100 μmol/L依折麦布、100 μmol/L胆固醇溶液和不同浓度(5.0、25.0、50.0 mmol/L)葡萄糖溶液。空白对照组:加入DMEM培养基和对应浓度DMSO。检测Caco-2细胞胆固醇吸收量。(3)Western blot检测三磷酸腺苷结合盒G8(ABCG8)、三磷酸腺苷结合盒G5(ABCG5)、尼克曼蛋白(NPC1L1)、B族Ⅰ型清道夫受体(SR-BⅠ)蛋白表达:将Caco-2细胞分为葡萄糖组、葡萄糖+依折麦布组和对照组。葡萄糖组:加入不同浓度(5.0、25.0、50.0 mmol/L)葡萄糖溶液。葡萄糖+依折麦布组:加入不同浓度(5.0、25.0、50.0mmol/L)葡萄糖溶液和100 μmol/L依折麦布。对照组加入100 μmol/L依折麦布。采用Western blot检测各组ABCG8、ABCG5、NPC1L1、SR-BⅠ蛋白相对表达量。计量资料以

±s表示,变化趋势检验采用重复测量方差分析,组间比较采用t检验。

结果

(1)CCK-8检测结果显示:葡萄糖溶液浓度为12.5、100.0、300.0、700.0、1 000.0、1 388.0 mmol/L的Caco-2细胞增殖率分别为1.380±0.043、1.238±0.072、0.736±0.035、0.336±0.021、0.316±0.020、0.288±0.010,6者比较,差异有统计学意义(F=11.019,P<0.05)。葡萄糖溶液对Caco-2细胞半数抑制浓度为283.54 mmol/L。(2)Caco-2细胞胆固醇吸收量:①胆固醇组葡萄糖溶液浓度为5.0、25.0、50.0 mmol/L的Caco-2细胞胆固醇吸收量分别为0.282±0.042、0.380±0.063、0.390±0.060,胆固醇+依折麦布组葡萄糖溶液浓度为5.0、25.0、50.0 mmol/L的Caco-2细胞胆固醇吸收量分别为0.042±0.012、0.197±0.015、0.277±0.029,两组比较,差异有统计学意义(F=55.566,P<0.05)。②胆固醇组不同浓度葡萄糖溶液的Caco-2细胞胆固醇吸收量比较,差异有统计学意义(F=79.117,P<0.05);葡萄糖溶液浓度为5.0 mmol/L的Caco-2细胞胆固醇吸收量分别低于葡萄糖溶液浓度为25.0 mmol/L和50.0 mmol/L的Caco-2细胞,差异均有统计学意义(t=11.207,11.532,P<0.05);葡萄糖溶液浓度为25.0 mmol/L的Caco-2细胞胆固醇吸收量与葡萄糖溶液浓度为50.0 mmol/L的Caco-2细胞比较,差异无统计学意义(t=12.389,P>0.05)。③葡萄糖溶液浓度为5.0、25.0 mmol/L的胆固醇组和胆固醇组+依折麦布组的Caco-2细胞胆固醇吸收量比较,差异均有统计学意义(t=10.908,10.644,P<0.05)。(3)Western blot检测结果显示:①葡萄糖组葡萄糖溶液浓度为5.0、25.0、50.0 mmol/L的Caco-2细胞NPC1L1蛋白相对表达量分别为0.277±0.019、0.558±0.015、0.576±0.003,葡萄糖+依折麦布组葡萄糖溶液浓度为5.0、25.0、50.0 mmol/L的Caco-2细胞NPC1L1蛋白相对表达量分别为0.057±0.002、0.054±0.005、0.077±0.005,两组比较,差异有统计学意义(F=482.207,P<0.05)。②葡萄糖组不同浓度葡萄糖溶液的Caco-2细胞NPC1L1蛋白相对表达量比较,差异有统计学意义(F=8.112,P<0.05)。葡萄糖+依折麦布组不同浓度葡萄糖溶液的Caco-2细胞NPC1L1蛋白相对表达量比较,差异有统计学意义(F=11.708,P<0.05)。③葡萄糖溶液浓度为5.0、25.0、50.0 mmol/L的葡萄糖组和葡萄糖+依折麦布组的Caco-2细胞NPC1L1蛋白相对表达量比较,差异均有统计学意义(t=8.112,11.708,13.920,P<0.05)。

结论

高浓度葡萄糖溶液可能通过增加Caco-2细胞中NPC1L1蛋白的表达,促进胆固醇的重吸收,增加糖尿病患者罹患胆石症的风险。

其他文献
目的 探索物理损伤与基质细胞衍生因子1α(stromal cell-derived factor-1α,SDF-1α)对大鼠心肌细胞增殖和细胞因子表达的影响.方法 培养大鼠心肌细胞,采用刮伤法建立物理损伤模型,添加80 μg/L SDF-1α进行联合培养;BrdU法检测各组心肌细胞的增殖能力;碘化丙啶(PI)染色联合流式细胞仪检测各组心肌细胞周期变化;免疫细胞化学法和Western印迹方法检测心肌
目的 研究饮食诱导的肥胖大鼠模型下丘脑、肝、胰等组织器官中G蛋白耦联的内向整流型K离子通道蛋白4(GIRK4)的表达.方法 30只SD大鼠按随机数字表分两组,肥胖大鼠组(20只,高脂高糖饮食构建肥胖大鼠模型)和正常对照组(10只,正常饮食).建模成功处死两组大鼠后分离下丘脑、肝、胰等组织器官,提取蛋白,Western免疫印迹检测GIRK4表达.对肥胖大鼠组与正常对照组大鼠体质量、体长、脂肪系数等指