【摘 要】
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目的观察丙型肝炎病人外周血B细胞长期存活状态下其中是否仍有丙型肝炎病毒(HCV)存在,探讨建立HCV体外复制细胞模型的可能性。方法利用EB病毒转化B淋巴细胞技术,建立丙型肝炎患者
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目的观察丙型肝炎病人外周血B细胞长期存活状态下其中是否仍有丙型肝炎病毒(HCV)存在,探讨建立HCV体外复制细胞模型的可能性。方法利用EB病毒转化B淋巴细胞技术,建立丙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC )HCV阳性传代细胞株(LCL),并应用细胞培养、染色体显示、流式细胞荧光染色、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组化、原位RT-PCR及电镜等技术研究其分子生物学和免疫学特性。结果(1) LCL细胞核型47,XX,+mar,细胞表面CD19、CD20抗原阳性,CD21分子消失。(2)传代培养细胞中HCV RNA正链持续12个月阳性,而培养上清中则呈间断性阳性,无明显规律。HCV RNA负链在LCL细胞中也呈间断阳性。HCV基因分型为Ⅱ型株。(3)免疫组化、原位PCR和电镜发现HCV抗原蛋白、HCV RNA和病毒颗粒均存在于LCL细胞浆中;电镜发现HCV病毒颗粒呈圆球型,双层膜结构,定位于细胞胞质空泡内。直径多为45~70nm,个别为110nm。结论 HCV可以在EB病毒转化病人B细胞株中长期存活、复制和分泌。
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