【摘 要】
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目的分离与鉴定甲型H1N1流感病毒感染犬肾(MDCK)细胞外泌体。方法以甲型H1N1流感病毒感染MDCK细胞,采用间接免疫荧光法确定最佳外泌体收集时间;通过沉淀法和免疫磁珠法相结合
【机 构】
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南开大学药学院,国家卫生健康委员会肠道病原微生物重点实验室江苏省疾病预防控制中心,中国科学院生物物理研究所,天津国际生物医药联合研究院
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目(81871666),“十三五”国家科技重大专项计划(2017ZX10302301),江苏省自然科学基金(BK20191489),江苏省“六大人才高峰”高层次人才项目(WSN-024)
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目的分离与鉴定甲型H1N1流感病毒感染犬肾(MDCK)细胞外泌体。方法以甲型H1N1流感病毒感染MDCK细胞,采用间接免疫荧光法确定最佳外泌体收集时间;通过沉淀法和免疫磁珠法相结合提取分离外泌体,并采用透射电镜观察形态并检测粒径,以Western blot鉴定标志蛋白。结果病毒接种24h后,>90%MDCK细胞被流感病毒感染,95%细胞保持活性,选取感染24h作为外泌体收集时间点;透射电镜检测发现,流感病毒-外泌体呈圆形囊泡状,直径约30~150nm;粒径检测结果显示,外泌体粒径主峰85.1nm,平
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