重组2型腺相关病毒-人骨形成蛋白7转染犬髓核细胞及其对髓核细胞表型的影响

来源 :中国脊柱脊髓杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:smaboat
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目的:观察重组2型腺相关病毒-人骨形成蛋白7(recombinant adeno-associated virus-2 expressing human bone morphogenetic protein-7,rAAV2-hBMP7)转染犬髓核细胞情况及其对细胞表型的影响.方法:用1岁龄Beagle犬L4/5椎间盘髓核进行髓核细胞体外培养,取第2代髓核细胞进行实验,实验组以rAAV2-hBMP7(1x105v.g/细胞)转染髓核细胞,对照组以重组2型腺相关病毒-增强型绿色荧光蛋白(recombinant adeno-associated virus-2 expressing enhanced green fluorescent protein,rAAV2-EGFP)转染髓核细胞.在转染后4d、7d和14d以PCR检测髓核细胞中hBMP7的mRNA表达,在转染后7d和14d以Western blot法检测髓核细胞中hBMP7蛋白表达.在转染后4d、7d和14d采用RT-PCR法检测蛋白多糖、Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原的mRNA含量,采用二甲基蓝及ELISA法分别检测蛋白多糖、Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原的蛋白含量,结果:实验组髓核细胞表达hBMP7 mRNA及蛋白,并于转染后7d时表达量最高,而对照组无表达.实验组髓核细胞蛋白多糖mRNA及蛋白含量在转染后7d和14d 时较4d时明显增高,14d时较7d时亦明显升高(P0.05);4d时实验组与对照组比较无明显差异,7d和14d时较对照组明显增加(P0.05).实验组髓核细胞Ⅱ型胶原mRNA及蛋白含量存转染后7d和14d时较4d时明显增高,14d时较7d亦明显升高(P
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