【摘 要】
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目的 构建表达严重急性呼吸综合征冠状病毒2（severe acute respiratory symptom coronavirus 2,SARS-CoV-2）Delta突变株S蛋白受体结合域（receptor binding domain,RBD）和N蛋白的重组腺病毒，并进行鉴定。方法 将SARSCoV-2 RBD和N基因片段分别克隆至pcDNA3.0BA载体上，构建重组质粒pcDNA3.0BA
【基金项目】
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云南省应用基础研究计划（202201AT070236）； 云南省重大科技专项（202202AA100006）； 中国医学科学院医学与健康科技创新工程重大协同创新项目（2021-I2M-1-043）；
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目的 构建表达严重急性呼吸综合征冠状病毒2（severe acute respiratory symptom coronavirus 2,SARS-CoV-2）Delta突变株S蛋白受体结合域（receptor binding domain,RBD）和N蛋白的重组腺病毒，并进行鉴定。方法 将SARSCoV-2 RBD和N基因片段分别克隆至pcDNA3.0BA载体上，构建重组质粒pcDNA3.0BA-RBD-N,PCR扩增RBD-CMVN片段，连接至穿梭载体pShuttle-CMV上，将穿梭质粒pShuttle-RBD-N与pAdeasy-1进行同源重组，获得重组质粒pAdeasy-1-RBD-N，转染HEK293细胞进行重组腺病毒Ad-RBD-N包装，RT-PCR法检测重组腺病毒中RBD和N基因在HEK293细胞中的转录，Western blot和免疫荧光法检测重组腺病毒中RBD和N蛋白的表达。将Ad-RBD-N通过肌肉注射免疫12只雌性BALB/c小鼠，免疫剂量为5×109copies/只，免疫后14 d经尾静脉采血，ELISA法检测血清抗体效价。结果 重组腺病毒RBD和N基因能在HEK293细胞中正常转录，RBD和N蛋白能在MA104细胞中正常表达。免疫重组腺病毒的小鼠可产生针对RBD和N蛋白的特异性IgG抗体。结论 成功构建了表达SARS-CoV-2 Delta突变株S蛋白RBD和N蛋白的重组腺病毒，为Delta突变株疫苗的后续研究奠定了基础。
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