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奶牛乳房炎是奶牛养殖中最常见多发的一种乳腺疾病，发病率高，危害极其严重，是造成奶牛业经济损失的四大疾病之一。患病牛主要临床表现为产奶量减少、挤奶时明显疼痛甚至拒绝挤奶。奶牛乳房炎是全世界奶牛养殖业健康发展的障碍，不仅使得奶牛发病后造成泌乳机能不同程度地下降，还对乳品质产生影响，甚至对人类的健康也带来潜在的威胁。据统计我国奶牛养殖业中乳房炎发病率在15%～40%左右，故对奶牛乳房炎必须予以重视，养殖场应加强防范和治疗。奶牛乳房炎的病因很多，但与养殖环境中的病原微生物的侵入有直接的关系，研究发现奶牛乳腺炎主要发病原因是由链球菌、葡萄球菌和大肠杆菌等条件性致病菌引起的；此外气候变更、外力及遗传因素等都对乳房炎的诱发有一定的影响，如寒冷阴湿的季节发生率较高。本研究对2016年5月本地区某规模荷斯坦奶牛场患乳房炎的奶牛经治疗后仍未痊愈的奶牛病例的鲜奶样品中的病原菌进行了分离和鉴定，以期了解顽固病牛的病原菌感染情况，为寻找有效的治疗及控制奶牛乳房炎的发生提供科学的依据。
1材料与方法
1.1材料
采自当地某奶牛场患乳房炎、有临床症状且已经局部和全身用药治疗但体温仍偏高、泌乳量明显少的泌乳奶牛乳区收集乳样，同时收集健康乳区乳样进行对照。
1.2主要试剂与仪器
麦康凯培养基、含4%牛血清及0.1%裂解血的培养基、选择培养基（包括7.5%甘露醇NaCl琼脂、S.S.琼脂、伊红美兰琼脂等）、PCR Mix、16S通用引物、生化反应管；电热恒温培养箱、DYY-6C型电泳仪、PCR仪、凝胶成像仪等。
1.3乳样的采集及处理
采集乳样前应先将乳区及操作人员手部彻底消毒后，弃去前面流出的乳汁，然后在无菌乳区采集50mL左右的鲜乳置于无菌的离心管中并作好标记，低温保存并快速送至实验室进行相关试验。
1.4乳样细菌培养
无菌环境下将病牛和健康牛的乳样分别涂在麦康凯培养基、含4%牛血清及0.1%裂解血的培养基及各种选择培养基上后，将各培养基置于37～C电热恒温培养箱中培养24h，观察各培养基表面细菌的生长情况；
1.5菌落PCR鉴定及生化反应试验
将含4%牛血清及0.1%裂解血的培养基及各种选择培养基上的菌落溶解于无菌的生理盐水中，煮沸10min后，应用16S通用引物进行PCR扩增，PCR产物经1%的琼脂糖凝胶电泳鉴定结果显示扩增的目的片段与预期的大小一致。将其送到上海生工测序，将测序结果与NCBI上公布的序列进行比对。将测序比对结果为葡萄球菌的接种于各生化反应发酵管，培养24h后，观察结果。
2细菌分离培养结果
从两份乳样麦康凯培养基上均可见有砖红色，圆形凸起的菌落，由此可见乳样中均含有大肠杆菌；含4%牛血清及0.1%裂解血的培养基及各种选择培养基上的菌落经16S PCR鉴定、序列比对及葡萄球菌生化反应试验结果显示两份乳样中共分离出细菌2种，其中葡萄球菌属细菌共有5株，以金黄色葡萄球菌最多。
3小结与讨论
本次试验因病料采集数量有限，因此分离出的细菌种类及数量均不是很多，同时当前仍有很多细菌不能通过细菌培养的方式获得，故存在部分致病菌的遺漏不能检出。为全面获得致病菌信息，在牛乳房炎的诊治过程中，可考虑应用多重PCR及高通量测序进行鉴别。通常健康牛乳和患乳房炎病牛分泌的乳汁中细菌种类很多，但最常见乳房炎致病菌是大肠杆菌、乳房链球菌、克雷伯氏菌等，其次是停乳链球菌、化脓杆菌、金黄色葡萄球菌等，研究发现在健康或亚临床乳样中乳房链球菌、停乳链球菌、金黄色葡萄球菌等细菌含量低于临床型乳房炎，且健康乳样中不含有大肠杆菌。但本次试验在健康牛乳对照中也分离到了大肠杆菌，而乳房炎常见的病原菌如链球菌等均没有分离到，分析原因可能是由于单纯从临床症状来判定是否患有乳房炎而导致，缺乏SCC等方法对隐性乳房炎的排除等。
奶牛乳房炎的危害性大、治愈困难，在实际生产中应坚持以“预防为主、早发现早治疗”的原则预防控制乳房炎。奶牛乳房炎按临床表现可分为急性型奶牛乳房炎、慢性型奶牛乳房炎和隐性乳房炎三种，及时治疗是急性型乳房炎和慢性型乳房炎的关键措施，而隐性乳房炎应重点加强控制和预防工作。调查发现在各大养牛场中隐性乳腺炎普遍存在，其发病率可高达60%，隐性病例如不及时诊治，易转变成临床型乳腺炎，带来巨大的经济损失，因此加强做好隐I生感染病例的诊治预防工作，可以从根源上减少和杜绝致病微生物的存在，具有极为重要的现实意义。奶牛乳房炎绝大多数都是因为乳区感染致病细菌而导致，因此奶牛乳房炎防控应从饲养环境、病原菌来源等基本环节进行人工干预，如牛床设计合理、保持牛舍的环境卫生、及时更换垫料和清理污水粪便、定期消毒等，通过加强牛群的饲养管理、净化环境、补充营养物质、增强机体抗病力、淘汰阳性奶牛及加强疫苗免疫等措施降低乳腺炎的发生。对于微生物感染引发的乳腺炎在诊治时应有针对性地选择药物和投药方法，有条件的养殖场最好先进行药敏试验来筛选最佳药物进行有效快速的治疗。奶牛发生乳腺炎会直接影响乳汁品质，人类饮用后也会影响到人类的身体健康，对公共卫生造成一定的威胁。应及时淘汰慢性或久治不愈的奶牛，防止病原微生物扩散，消除传染源，因此养牛场应定期进行全场牛群乳房炎检测工作及建立健全科学的疫病防御体系及检疫制度，以便及时了解该病的流行情况，并提前提高奶牛的自然抗病能力，显著降低乳房炎发病率。
1材料与方法
1.1材料
采自当地某奶牛场患乳房炎、有临床症状且已经局部和全身用药治疗但体温仍偏高、泌乳量明显少的泌乳奶牛乳区收集乳样，同时收集健康乳区乳样进行对照。
1.2主要试剂与仪器
麦康凯培养基、含4%牛血清及0.1%裂解血的培养基、选择培养基（包括7.5%甘露醇NaCl琼脂、S.S.琼脂、伊红美兰琼脂等）、PCR Mix、16S通用引物、生化反应管；电热恒温培养箱、DYY-6C型电泳仪、PCR仪、凝胶成像仪等。
1.3乳样的采集及处理
采集乳样前应先将乳区及操作人员手部彻底消毒后，弃去前面流出的乳汁，然后在无菌乳区采集50mL左右的鲜乳置于无菌的离心管中并作好标记，低温保存并快速送至实验室进行相关试验。
1.4乳样细菌培养
无菌环境下将病牛和健康牛的乳样分别涂在麦康凯培养基、含4%牛血清及0.1%裂解血的培养基及各种选择培养基上后，将各培养基置于37～C电热恒温培养箱中培养24h，观察各培养基表面细菌的生长情况；
1.5菌落PCR鉴定及生化反应试验
将含4%牛血清及0.1%裂解血的培养基及各种选择培养基上的菌落溶解于无菌的生理盐水中，煮沸10min后，应用16S通用引物进行PCR扩增，PCR产物经1%的琼脂糖凝胶电泳鉴定结果显示扩增的目的片段与预期的大小一致。将其送到上海生工测序，将测序结果与NCBI上公布的序列进行比对。将测序比对结果为葡萄球菌的接种于各生化反应发酵管，培养24h后，观察结果。
2细菌分离培养结果
从两份乳样麦康凯培养基上均可见有砖红色，圆形凸起的菌落，由此可见乳样中均含有大肠杆菌；含4%牛血清及0.1%裂解血的培养基及各种选择培养基上的菌落经16S PCR鉴定、序列比对及葡萄球菌生化反应试验结果显示两份乳样中共分离出细菌2种，其中葡萄球菌属细菌共有5株，以金黄色葡萄球菌最多。
3小结与讨论
本次试验因病料采集数量有限，因此分离出的细菌种类及数量均不是很多，同时当前仍有很多细菌不能通过细菌培养的方式获得，故存在部分致病菌的遺漏不能检出。为全面获得致病菌信息，在牛乳房炎的诊治过程中，可考虑应用多重PCR及高通量测序进行鉴别。通常健康牛乳和患乳房炎病牛分泌的乳汁中细菌种类很多，但最常见乳房炎致病菌是大肠杆菌、乳房链球菌、克雷伯氏菌等，其次是停乳链球菌、化脓杆菌、金黄色葡萄球菌等，研究发现在健康或亚临床乳样中乳房链球菌、停乳链球菌、金黄色葡萄球菌等细菌含量低于临床型乳房炎，且健康乳样中不含有大肠杆菌。但本次试验在健康牛乳对照中也分离到了大肠杆菌，而乳房炎常见的病原菌如链球菌等均没有分离到，分析原因可能是由于单纯从临床症状来判定是否患有乳房炎而导致，缺乏SCC等方法对隐性乳房炎的排除等。
奶牛乳房炎的危害性大、治愈困难，在实际生产中应坚持以“预防为主、早发现早治疗”的原则预防控制乳房炎。奶牛乳房炎按临床表现可分为急性型奶牛乳房炎、慢性型奶牛乳房炎和隐性乳房炎三种，及时治疗是急性型乳房炎和慢性型乳房炎的关键措施，而隐性乳房炎应重点加强控制和预防工作。调查发现在各大养牛场中隐性乳腺炎普遍存在，其发病率可高达60%，隐性病例如不及时诊治，易转变成临床型乳腺炎，带来巨大的经济损失，因此加强做好隐I生感染病例的诊治预防工作，可以从根源上减少和杜绝致病微生物的存在，具有极为重要的现实意义。奶牛乳房炎绝大多数都是因为乳区感染致病细菌而导致，因此奶牛乳房炎防控应从饲养环境、病原菌来源等基本环节进行人工干预，如牛床设计合理、保持牛舍的环境卫生、及时更换垫料和清理污水粪便、定期消毒等，通过加强牛群的饲养管理、净化环境、补充营养物质、增强机体抗病力、淘汰阳性奶牛及加强疫苗免疫等措施降低乳腺炎的发生。对于微生物感染引发的乳腺炎在诊治时应有针对性地选择药物和投药方法，有条件的养殖场最好先进行药敏试验来筛选最佳药物进行有效快速的治疗。奶牛发生乳腺炎会直接影响乳汁品质，人类饮用后也会影响到人类的身体健康，对公共卫生造成一定的威胁。应及时淘汰慢性或久治不愈的奶牛，防止病原微生物扩散，消除传染源，因此养牛场应定期进行全场牛群乳房炎检测工作及建立健全科学的疫病防御体系及检疫制度，以便及时了解该病的流行情况，并提前提高奶牛的自然抗病能力，显著降低乳房炎发病率。