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目的：为准确测定土茯苓中落新妇苷的含量，探索提高理论板数、分离度的方法提供依据。方法采用不同品牌色谱柱、调节流速、进样量、色谱柱温度，分别测定落新妇苷的保留时间、分离度、理论板数。结果色谱柱、流速、进样量、色谱柱温度等的不同均可影响高效液相色谱的保留时间、分离度、理论板数。结论在高效液相色谱测定时，可通过采用不同品牌的色谱柱，调整流速、进样量、色谱柱温度等方法改善液相色谱的分离度、理论板数。