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[摘要]目的：研究复方蜂胶铬酵母软胶囊对高血糖小鼠的降糖效果。方法：采用胰岛损伤高血糖模型，设0.057、0.113、0.340g/kg·BW三个剂量组，相当于复方蜂胶铬酵母软胶囊的人体推荐剂量的5、10、30倍，连续给予小鼠灌胃30天，观察高血糖模型动物降糖实验、糖耐量实验以及正常小鼠的降糖实验的降糖效果。结果：高血糖模型小鼠空腹血糖结果显示，各剂量组实验前后血糖下降率与高糖对照组比较，差异均有显著性意义（p<0.05）;糖耐量实验结果显示，各剂量组高糖对照组比较，差异无显著性意义（P>0.05）;正常小鼠空腹血糖实验结果显示，正常动物高剂量组给样后血糖与溶剂对照组比较，差异无显著性意义（P>0.05）。结论：复方蜂胶铬酵母软胶囊辅助降血糖功能动物试验阳性。
[关键词]蜂胶;铬酵母;小鼠;降血糖
[中图分类号]R285 [文献标识码]A [文章编号]2096-5249（2019）15-0060-02
糖尿病是一种常见的内分泌疾病，现已成为继心血管疾病、肿瘤之后危害人类健康的第三大杀手。目前全球糖尿病患者已超过1.2亿人，我国患者人群居世界第二，目前中国的糖尿病发病率高达9.6%，未来50年内糖尿病仍将是中国一个严重的公共卫生问题。从调查数据看中国的糖尿病现状已非常严峻内，目前中国已成为全球范围糖尿病增长最快的地区并且成为世界糖尿病第一大国。本实验将以复方蜂胶铬酵母软胶囊为受试物，探讨其对高血糖小鼠的降糖效果，为复方蜂胶铬酵母软胶囊的推广提供实验依据。
1材料和方法
1.1仪器与试剂：日立7060型全自动生化分析仪、四氧嘧啶（美国Sigma公司）、葡萄糖（广州化学试剂厂）、血糖测定试剂盒（中生北控生物科技股份有限公司）
1.2受试样品：复方蜂胶铬酵母软胶囊（广东佰嘉药业有限公司提供），680mg/粒（含巴西绿蜂胶250mg，铬酵母55mg），每日1次，每次1粒，折合人体推荐剂量（成人按60kg体重计）0.0113g/kg·BW。
1.3动物：SPF级昆明种雄性小白鼠，6-8周龄、体重26±2g，由广东省实验动物中心提供（动物生产许可证号：SCXK（粤）2011-0002号，质量合格证编号：NO 440072000116361。颗粒饲料由广东省实验动物中心提供。
1.4试验方法
1.4.1受试物制备：每日称取0.680g受试样品，用聚乙二醇调配至20.0ml作为高剂量组受试物，然后量取2.5、5.0ml高剂量组受试物，用聚乙二醇调配至15.0ml制成低、中剂量组受试物。
1.4.2给予受试物途径：各剂量组和正常动物高剂量组按每日一次，每次0.1ml/10g-BW灌胃给予受试物，溶剂对照组和高糖对照组按同等容量灌胃给予聚乙二醇。
1.4.3高血糖小鼠造模：按照国食药监保化[2012]107号附件3《辅助降血糖功能评价方法》，按照胰岛损伤高血糖模型进行试验。最后选取血糖值10-25mmol/L的动物为高血糖模型成功动物。
1.4.4剂量设计：设0.057、0.113、0.340g/kg.BW三个剂量组、相当于人体推荐剂量的5、10、30倍，另设溶剂对照组、高糖对照组、正常动物高剂量组。由于受试物不溶于水和植物油，故采用聚乙二醇作溶剂。
1.4.5高血糖模型动物降糖实验：高血糖模型动物分高糖对照组和三个样品剂量组，每组12只，调整组间血糖值相差小于1.1mmol/L剂量组分别给予不同剂量受试物，模型对照组按同等容量灌胃给予溶剂，试验共30天，实验结束时动物禁食5小时后测定空腹血糖值，比较各组动物血糖值及血糖下降百分率。
血糖下降百分率=（实验前血糖-实验后血糖）/实验前血糖值×100%
1.4.6高血糖模型动物糖耐量实验：高血糖模型动物分高糖对照组和三个样品剂量组，剂量分组及受试样品给予时间同1.4.5，每组12只。禁食5小时后，剂量组分别给予不同剂量受试物，高糖对照组按同等容量灌胃给予溶剂。20分钟后各鼠经口给予2.0g/kg.BW的葡萄糖（用纯净水配制），测定给葡萄糖后0、0.5、2小时三时间点的血糖值，计算各剂量组与高血糖模型对照组三时间点的血糖曲线下面积。
血糖曲线下面积=1/4x（0小时血糖+4×0.5小时血糖+3x2小时血糖）
1.4.7正常动物降糖实验：实验设正常动物高剂量组和溶剂对照组。将正常小鼠随机分成2组，每组12只，测定禁食5小时后的空腹血糖值，正常动物高剂量组每日经口灌胃给予0.340g/kg.BW受试物（相当于推荐日服量的30倍），溶剂对照组按同等容量灌胃给予溶剂，试验共30日，实验结束时动物禁食5小时后测定空腹血糖值，观察受试样品对正常动物空腹血糖的影响。
2试验结果与分析
2.1受试样品对高血糖模型小鼠空腹血糖的影响：从表l、2可见，各剂量组实验后血糖与高糖对照组比较降低;各剂量组实验前后血糖下降率与高糖对照组比较，差异均有显著性意义（p<0.05）。表明试验结果为阳性。
2.2受试样品对高血糖模型小鼠糖耐量的影响：从表3、4可见，各剂量组三时点血糖曲线下面积与高糖对照组比较，差异无显著性意义（P>0.05）。表明实验结果为阴性。
2.3受试样品对正常小鼠空腹血糖的影响：由表5可见，正常动物高剂量组给样后血糖与溶剂对照组比较，差异无显著性意义（p>0.05），表明复方蜂胶铬酵母软胶囊对正常小鼠空腹血糖无明显影响。
2.4受试样品对高血糖模型小鼠实验前、后体重的影响：由表1、4可见，各剂量组小鼠实验前后体重与高糖对照组比较，差异无显著性意义（P>0.05），表明复方蜂胶铬酵母软胶囊对高血糖模型动物体重无明显影响。
3结论
对SPF级昆明种小鼠每日经口给予0.057、0.113、0.340g/kg-BW剂量的复方蜂胶铬酵母软胶囊，为推荐日服量的5、10、30倍，试验时间共30天。结果显示：
受试样品能够增加高血糖模型小鼠的空腹血糖下降率，实验结果阳性。
受试样品未能减少高血糖模型小鼠的血糖曲线下面积，糖耐量实验结果阴性。
受试样品对正常小鼠的空腹血getff没有明显影响。
根据国食药监保化[2012]107号附件3的《辅助降血糖功能评价方法》判定标准，复方蜂胶铬酵母软胶囊辅助降血糖功能动物试验阳性。
4讨论
巴西绿蜂胶是蜂胶的一个酒神菊属品种，多项研究资料表明，蜂胶能够有效降低小鼠、人體的血糖水平。日本也有两项研究证实，巴西绿蜂胶同样具有降血糖功能。铬是人和动物必需的微量元素之一，对维持生物体正常的生理代谢有重要的意义。生物体缺铬会出现胆固醇或血糖升高、生长迟缓、免疫下降等症状，在吸收和生物利用能力方面，有机形式比无机形式更有利于吸收和利用…。研究证明，铬酵母可改善糖代谢和微循环，降低血糖水平。
本次实验研究结果，复方蜂胶铬酵母软胶囊具有辅助降血糖功能，与巴西绿蜂胶和铬酵母这两种原料本身具有调节血糖功能，结果是一致的。
[关键词]蜂胶;铬酵母;小鼠;降血糖
[中图分类号]R285 [文献标识码]A [文章编号]2096-5249（2019）15-0060-02
糖尿病是一种常见的内分泌疾病，现已成为继心血管疾病、肿瘤之后危害人类健康的第三大杀手。目前全球糖尿病患者已超过1.2亿人，我国患者人群居世界第二，目前中国的糖尿病发病率高达9.6%，未来50年内糖尿病仍将是中国一个严重的公共卫生问题。从调查数据看中国的糖尿病现状已非常严峻内，目前中国已成为全球范围糖尿病增长最快的地区并且成为世界糖尿病第一大国。本实验将以复方蜂胶铬酵母软胶囊为受试物，探讨其对高血糖小鼠的降糖效果，为复方蜂胶铬酵母软胶囊的推广提供实验依据。
1材料和方法
1.1仪器与试剂：日立7060型全自动生化分析仪、四氧嘧啶（美国Sigma公司）、葡萄糖（广州化学试剂厂）、血糖测定试剂盒（中生北控生物科技股份有限公司）
1.2受试样品：复方蜂胶铬酵母软胶囊（广东佰嘉药业有限公司提供），680mg/粒（含巴西绿蜂胶250mg，铬酵母55mg），每日1次，每次1粒，折合人体推荐剂量（成人按60kg体重计）0.0113g/kg·BW。
1.3动物：SPF级昆明种雄性小白鼠，6-8周龄、体重26±2g，由广东省实验动物中心提供（动物生产许可证号：SCXK（粤）2011-0002号，质量合格证编号：NO 440072000116361。颗粒饲料由广东省实验动物中心提供。
1.4试验方法
1.4.1受试物制备：每日称取0.680g受试样品，用聚乙二醇调配至20.0ml作为高剂量组受试物，然后量取2.5、5.0ml高剂量组受试物，用聚乙二醇调配至15.0ml制成低、中剂量组受试物。
1.4.2给予受试物途径：各剂量组和正常动物高剂量组按每日一次，每次0.1ml/10g-BW灌胃给予受试物，溶剂对照组和高糖对照组按同等容量灌胃给予聚乙二醇。
1.4.3高血糖小鼠造模：按照国食药监保化[2012]107号附件3《辅助降血糖功能评价方法》，按照胰岛损伤高血糖模型进行试验。最后选取血糖值10-25mmol/L的动物为高血糖模型成功动物。
1.4.4剂量设计：设0.057、0.113、0.340g/kg.BW三个剂量组、相当于人体推荐剂量的5、10、30倍，另设溶剂对照组、高糖对照组、正常动物高剂量组。由于受试物不溶于水和植物油，故采用聚乙二醇作溶剂。
1.4.5高血糖模型动物降糖实验：高血糖模型动物分高糖对照组和三个样品剂量组，每组12只，调整组间血糖值相差小于1.1mmol/L剂量组分别给予不同剂量受试物，模型对照组按同等容量灌胃给予溶剂，试验共30天，实验结束时动物禁食5小时后测定空腹血糖值，比较各组动物血糖值及血糖下降百分率。
血糖下降百分率=（实验前血糖-实验后血糖）/实验前血糖值×100%
1.4.6高血糖模型动物糖耐量实验：高血糖模型动物分高糖对照组和三个样品剂量组，剂量分组及受试样品给予时间同1.4.5，每组12只。禁食5小时后，剂量组分别给予不同剂量受试物，高糖对照组按同等容量灌胃给予溶剂。20分钟后各鼠经口给予2.0g/kg.BW的葡萄糖（用纯净水配制），测定给葡萄糖后0、0.5、2小时三时间点的血糖值，计算各剂量组与高血糖模型对照组三时间点的血糖曲线下面积。
血糖曲线下面积=1/4x（0小时血糖+4×0.5小时血糖+3x2小时血糖）
1.4.7正常动物降糖实验：实验设正常动物高剂量组和溶剂对照组。将正常小鼠随机分成2组，每组12只，测定禁食5小时后的空腹血糖值，正常动物高剂量组每日经口灌胃给予0.340g/kg.BW受试物（相当于推荐日服量的30倍），溶剂对照组按同等容量灌胃给予溶剂，试验共30日，实验结束时动物禁食5小时后测定空腹血糖值，观察受试样品对正常动物空腹血糖的影响。
2试验结果与分析
2.1受试样品对高血糖模型小鼠空腹血糖的影响：从表l、2可见，各剂量组实验后血糖与高糖对照组比较降低;各剂量组实验前后血糖下降率与高糖对照组比较，差异均有显著性意义（p<0.05）。表明试验结果为阳性。
2.2受试样品对高血糖模型小鼠糖耐量的影响：从表3、4可见，各剂量组三时点血糖曲线下面积与高糖对照组比较，差异无显著性意义（P>0.05）。表明实验结果为阴性。
2.3受试样品对正常小鼠空腹血糖的影响：由表5可见，正常动物高剂量组给样后血糖与溶剂对照组比较，差异无显著性意义（p>0.05），表明复方蜂胶铬酵母软胶囊对正常小鼠空腹血糖无明显影响。
2.4受试样品对高血糖模型小鼠实验前、后体重的影响：由表1、4可见，各剂量组小鼠实验前后体重与高糖对照组比较，差异无显著性意义（P>0.05），表明复方蜂胶铬酵母软胶囊对高血糖模型动物体重无明显影响。
3结论
对SPF级昆明种小鼠每日经口给予0.057、0.113、0.340g/kg-BW剂量的复方蜂胶铬酵母软胶囊，为推荐日服量的5、10、30倍，试验时间共30天。结果显示：
受试样品能够增加高血糖模型小鼠的空腹血糖下降率，实验结果阳性。
受试样品未能减少高血糖模型小鼠的血糖曲线下面积，糖耐量实验结果阴性。
受试样品对正常小鼠的空腹血getff没有明显影响。
根据国食药监保化[2012]107号附件3的《辅助降血糖功能评价方法》判定标准，复方蜂胶铬酵母软胶囊辅助降血糖功能动物试验阳性。
4讨论
巴西绿蜂胶是蜂胶的一个酒神菊属品种，多项研究资料表明，蜂胶能够有效降低小鼠、人體的血糖水平。日本也有两项研究证实，巴西绿蜂胶同样具有降血糖功能。铬是人和动物必需的微量元素之一，对维持生物体正常的生理代谢有重要的意义。生物体缺铬会出现胆固醇或血糖升高、生长迟缓、免疫下降等症状，在吸收和生物利用能力方面，有机形式比无机形式更有利于吸收和利用…。研究证明，铬酵母可改善糖代谢和微循环，降低血糖水平。
本次实验研究结果，复方蜂胶铬酵母软胶囊具有辅助降血糖功能，与巴西绿蜂胶和铬酵母这两种原料本身具有调节血糖功能，结果是一致的。