【摘 要】
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目的制备MutS的高亲和抗体,以有利于MutS的检测及应用。方法利用IPTG的诱导作用,在E.coli中诱导表达目标蛋白MutS。利用亲和层析方法获得目标蛋白,并利用凝胶阻滞实验分析其
【基金项目】
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国家自然科学基金(30170211)项目资助
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目的制备MutS的高亲和抗体,以有利于MutS的检测及应用。方法利用IPTG的诱导作用,在E.coli中诱导表达目标蛋白MutS。利用亲和层析方法获得目标蛋白,并利用凝胶阻滞实验分析其活性。将MutS作为抗原,在Tomlinson抗体库中利用噬菌体展示技术来筛选MutS的高亲和力噬菌粒。将其转化到大肠杆菌后,诱导表达并通过亲和层析的方法来获得可溶性的抗体片段,并检测其亲和力。结果纯化后的MutS具有识别、结合错配DNA双链的活性。ELISA分析表明,利用噬菌体展示技术可获得MutS高亲和力的噬菌粒。将其转化到大肠杆菌HB2151后,诱导表达并纯化到抗体片段,其亲和力为0.9×108L/mol。结论利用噬菌体展示技术筛选到MutS高亲和力的抗体。
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