【摘 要】
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目的 提取、鉴定嗜黏蛋白阿克曼菌（Akkermansia muciniphila,AKK）的脂多糖（lipopolysaccharide,LPS），初步探讨AKK的LPS对小鼠巨噬细胞的影响。方法 试剂盒法提取AKK的LPS并纯化，ELISA法定量；BCA法、紫外分光光度法、SDS-PAGE和银染鉴定提取的LPS的纯度和结构；鲎试剂法检测LPS活性。体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7，分为正常对
【机 构】
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四川大学华西公共卫生学院/华西第四医院
【基金项目】
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四川省科技厅重点研发项目（2019YFS0304）；
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目的 提取、鉴定嗜黏蛋白阿克曼菌（Akkermansia muciniphila,AKK）的脂多糖（lipopolysaccharide,LPS），初步探讨AKK的LPS对小鼠巨噬细胞的影响。方法 试剂盒法提取AKK的LPS并纯化，ELISA法定量；BCA法、紫外分光光度法、SDS-PAGE和银染鉴定提取的LPS的纯度和结构；鲎试剂法检测LPS活性。体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7，分为正常对照组、大肠杆菌（Escherichia coli,E.coli）LPS组和AKK LPS组。经LPS作用后，CCK-8法检测细胞活性；RT-qPCR测定NF-κB、IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA表达水平。结果 纯化的细菌LPS平均产率为7.14%，蛋白、核酸含量分别为0.005 6‰和2.12%；银染结果显示AKK的LPS条带分布与E.coli的LPS不同；鲎试剂测定其活性为7.10×107EU/ml；部分干预浓度下，AKK LPS干预组细胞存活率低于E.coli LPS组；刺激6 h、12 h、24 h后，与正常对照组相比，AKK LPS干预组细胞内NF-κB的mRNA表达水平在干预6 h后显著上调，差异具有统计学意义（Z=-3.606,P=0.001）；两种LPS干预组的IL-1β、TNF-α、IL-6的mRNA表达水平在各时间点均高于对照组。结论 提取的AKK的LPS纯度较高，生物活性良好；AKK的LPS干预小鼠巨噬细胞，上调相关炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α及早期核转录因子NF-κB的转录表达。
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