【摘 要】
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目的构建表达绿色荧光蛋白的小鼠胚胎干细胞(MES)克隆,观察基因转染对MES细胞增殖和无血清诱导为nestin阳性神经前体细胞(NPCs)的影响.方法原代分离小鼠胚胎成纤维细胞并经丝
【机 构】
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第三军医大学基础医学部,生理学教研室,重庆,400038;第三军医大学基础医学部,神经生物学教研室,重庆,400038
【基金项目】
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重庆市应用基础研究基金;军队青年基金;国家自然科学基金
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目的构建表达绿色荧光蛋白的小鼠胚胎干细胞(MES)克隆,观察基因转染对MES细胞增殖和无血清诱导为nestin阳性神经前体细胞(NPCs)的影响.方法原代分离小鼠胚胎成纤维细胞并经丝裂霉素-C处理作为饲养层细胞.质粒的转化、抽提、纯化.电穿孔法基因转染,MES细胞克隆的NBT/BClP染色,NPCs的nestin免疫组织化学染色.结果 EGFP基因转染后可得到表达绿色荧光蛋白的MES细胞克隆,采用N2或ITSF无血清条件培养基可将其定向诱导为nestin阳性的并能发绿色荧光的NPCs.基因转染后的MES细胞增殖、神经前体细胞诱导率和未转染组相比均无明显下降,但NPCs绿色荧光的表达较诱导前明显下降.结论基因转染对ES细胞的增殖和神经分化无明显影响.
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