目的优化甲、乙型流感病毒在MDCK细胞上的培养条件,提高流感病毒的分离效果。方法将5种流感病毒液(甲型流感病毒:甲型H1N1、季节性H1N1、季节性H3N2和乙型流感病毒:Victoria、Yamagata)分别接种于MDCK细胞,通过比较不同的病毒接种量(30μl/cm2、60μl/cm2、90μl/cm2、120μl/cm2、150μl/cm2)、不同的病毒孵育时间(0.5 h、1.0 h、1.5 h、2.0 h、2.5 h、3.0 h)、不同的TPCK-胰酶添加浓度(1.0μg/ml、2.0μg/ml、3.0μg/ml、4.0μg/ml、5/0μg/ml)以及不同的MDCK细胞增毒代次(连续盲传5代)对5种流感病毒易感性的影响,确定其最佳分离效果;对分离后的病毒以红细胞凝集(HA)方法检测病毒滴度,结果通过对比病毒HA滴度结果,5种流感病毒(甲型H1N1、季节性H1N1、季节性H3N2、Victoria和Yamagata)的最佳病毒接种量分别为:90μl/cm2、90μl/cm2、60μl/cm2、120μl/cm2、120μl/cm2;最佳病毒孵育时间:甲型流感病毒为1.0~1.5 h,乙型流感病毒为2.0~2.5 h;胰酶最佳使用浓度分别是:2.0μg/ml、2.0μg/ml、2.0μg/ml、3.0μg/ml、3.0μg/ml;最适宜的细胞增毒传代次数为:1代、3代、2代、2代、2代;甲型流感病毒经培养后病毒的HA滴度低于乙型流感,甲型H1N1流感病毒经培养后HA滴度较低。结论甲型流感病毒对MDCK细胞的易感性低于乙型流感病毒;甲型H1N1流感病毒的分离效果低于季节性H1N1和季节性H3N2;Victoria与Yamagata的分离条件基本相同。