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该发明涉及一种防治松材线虫的生物毒素及制备方法，属生物农药技术领域。本生物毒素的生产菌株Pseudohalonectria adversaria（ZD1）。ZD1通过液体和麦粒固体培养后，从代谢产物中提取有效的水溶和脂溶性物质制备成杀线虫生物毒素。本技术对松材线虫有良好的毒杀效果，具有良好的应用开发前景。