TDG变体的构建、表达、纯化及其DNA修复功能研究

来源 :东南大学学报：医学版 | 被引量 : 0次 | 上传用户：hjjcumt

【摘要】

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目的：研究DNA错配修复蛋白 mTDG截短变体修复G：U错配的生物活性.方法：通过PCR扩增得到mTDG的C-端截短变体mTDG（1-279）基因片段,用Nde Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切并回收,然后插入双酶切过的

【作者】

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林小伟华子春

【机构】

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南京大学医药生物技术国家重点实验室

【出处】

：

东南大学学报：医学版

【发表日期】

：

2012年4期

【关键词】

：

胸腺嘧啶糖苷酶 G:U错配表达纯化活性测定 thymine DNA glycosylase G： U mismatch expression

【基金项目】

：

国家自然科学基金资助项目（31071196,81072712,50973046）,江苏省自然科学基金资助项目（BK2010046,BZ2010074,BK2011573,BZ2011048,BK2011228）

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目的：研究DNA错配修复蛋白 mTDG截短变体修复G：U错配的生物活性.方法：通过PCR扩增得到mTDG的C-端截短变体mTDG（1-279）基因片段,用Nde Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切并回收,然后插入双酶切过的原核表达载体pET28a（＋）,得到pET28a-mTDG（1-279）重组质粒.将重组质粒转化表达菌株BL21（DE3）,经IPTG诱导表达,过Ni＋柱纯化得到His- mTDG（1-279）融合蛋白.最后通过TDG体外测活试验,测试mTDG（1-279）蛋白对G：U错配的修复活性.结果：mTDG（

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