【摘 要】
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目的:探讨白藜芦醇(RSV)对人角膜上皮细胞(HCECs)炎症和氧化应激损伤的保护作用.方法:用肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导HCECs发生炎症反应,设对照组、TNF-α组、RSV+TNF-α组;用H2 O2诱导HCECs发生氧化应激反应,设正常组、H2 O2组、RSV+H2 O2组.采用MTT法检测细胞活力;RT-qPCR及酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测相关炎症因子IL-1、IL-6、IL-8的表达;免疫荧光染色法及Western blot法检测核因子-κB p65(NF-κB p65)的核转
【机 构】
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300020 中国天津市,天津医科大学眼科临床学院;300020 中国天津市,天津市眼科医院 南开大学附属眼科医院 天津市眼科研究所 天津市眼科学与视觉科学重点实验室;300020 中国天津市,天津医
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目的:探讨白藜芦醇(RSV)对人角膜上皮细胞(HCECs)炎症和氧化应激损伤的保护作用.方法:用肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导HCECs发生炎症反应,设对照组、TNF-α组、RSV+TNF-α组;用H2 O2诱导HCECs发生氧化应激反应,设正常组、H2 O2组、RSV+H2 O2组.采用MTT法检测细胞活力;RT-qPCR及酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测相关炎症因子IL-1、IL-6、IL-8的表达;免疫荧光染色法及Western blot法检测核因子-κB p65(NF-κB p65)的核转位;2\',7\'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)荧光探针法检测细胞内活性氧(ROS)水平.结果:在HCECs炎症反应中,RT-qPCR及ELISA结果均显示,与对照组相比,TNF-α 组的HCECs IL-1、IL-6、IL-8的表达水平均显著升高.RSV预处理细胞后,以上指标较TNF-α组显著下降;免疫荧光染色及Western blot结果均显示,TNF-α 组NF-κB p65核转位增加,而RSV预处理细胞后NF-κB p65核转位受到抑制.在HCECs氧化应激反应中,MTT和DCFH-DA荧光探针染色结果分别显示,H2 O2刺激使HCECs活力显著下降,HCECs内ROS的产生增多.而RSV预处理后,细胞活力显著上升,且RSV抑制了H2 O2诱导的HCECs内ROS的产生.结论:RSV对HCECs的炎症和氧化应激反应具有抑制作用,RSV通过抑制NF-κB通路激活以抑制炎症反应.
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