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摘要：随着科学技术的快速发展，测定食品中维生素C的方法越来越多，其中，荧光光度法具有线性关系好、灵敏密度高、精密度高等优点，因此被广泛采用。在传统的荧光测定法中，操作过程较为复杂，并且偏磷酸-醋酸溶液不易配制且存放时间较短，因此容易对测定效果造成影响。本文主要对传统的荧光测定法作了些许改进，以草酸替代偏磷酸-醋酸溶液，并在此基础上，针对影响荧光强度的因素、工作曲线、变异系数进行分析，结合本次研究，最终提出了改进后的荧光测定法与经典法相比较的结果，以及样品分析的具体方法。最终希望通过本文的分析研究，实现提高分析速度的目标。
关键词：维生素C 荧光光度法 食品测定
中图分类号：TQ466.3 文献标识码：A 文章编号：1672-5336（2015）02-0020-01
维生素C属于水溶性维生素，又称抗坏血酸（AA）。测量维生素C的方法很多，包括酶法、滴定法、光度法、电化学法等等，其中，关于荧光法测定维生素C的报道少之又少，没有得到有关学者的重视和关注。通过荧光法来测定食品中的抗坏血酸是建立在邻苯二胺（OPDA）基础上的，使其与抗坏血酸发生荧光反应。目前，荧光法由于其灵敏度较高、线性关系较好，被广泛应用于食品检测中，逐渐成为广大分析者争相关注的问题。但是，以偏磷酸-醋酸溶液为提取液的维生素总量的荧光测定方法十分复杂，且提取液难以配制，存放时间较短，对分析速度和准确度产生了不良影响。本文改进和完善了传统的荧光法测定，以草酸替代偏磷酸-醋酸溶液，并且将加醋酸钠及硼酸-醋酸钠的步骤加领苯二胺的步骤相结合，合并在一支试管内进行，在有效延长了存放时间的同时，实现了分析速度的大大提升。
1 实验
1.1 仪器
该实验主要采用产自日本岛津RF-5000荧光分光光度计，实验人员在实验前应做好相应的准备和调试工作。
1.2 试剂
（1）酸性活性炭，取100 g活性炭，以10%的HCL500 mL进行加热至沸腾约120s，再用水清洗3次，后置于120 ℃的高温下进行烘干，以供后期使用。（2）1%草酸水溶液。（3）醋酸钠溶液，实验人员应称取500 g醋酸钠溶液，使其在水中充分溶解，然后定容至1000 mL。（4）硼酸-醋酸钠溶液，称取硼酸9 g，使其充分溶解与35mL的醋酸钠溶液中，并定容至100 mL。在使用前，应注意新鲜配置。（5）邻苯二胺溶液，称取邻苯二胺溶液20 mg，并使其与100 mL水充分溶解，注意应新鲜配置并避光保存。（6）Vc标准液，称取Vc标准液25 mg，用1%的草酸定容至50 mL，使该溶液含有500Vc溶液。
1.3 操作步骤
（1）标准液；取50 mL的Vc标准液500至100 mL烧杯中，后加入活性炭2 g，并采用玻璃棒进行搅拌约120-180 s，静置一段时间后进行过滤。滤后可选取1.5 mL滤液置于25 mL容量瓶中，加水定容至刻度，持续摇匀，该溶液应含，作为标准工作液。
（2）样品液；取25 mL具塞比色管①、②，分别在各具塞比色管中加入2.0 mL标准工作液，再加入2.0 mL硼酸-醋酸钠溶液进入①，摇匀后，放置约900 s；于②中加入2.0 mL醋酸钠溶液，同样摇匀后，向①、②加入10 mL邻苯二胺溶液，将①、②放置于阴暗处约2400 s，后进行荧光强度的测定。
（3）样品分析实例；饮料类：将10 mL样品放入50 mL容量瓶中，将10mL的1%草酸溶液加入其中，以水定容使其到达刻线。然后将定容液倒置100 mL的烧杯中，如果溶液中含有悬浮物或沉淀物，则需要通过滤纸将其过滤到烧杯中。定容液倒置烧杯后，加入活性炭2 g，再用玻璃棒搅拌，剧烈搅拌3 min左右，将其稍稍静置，然后利用滤纸将其过滤。将过滤后的溶液取5 mL，放置25 mL容量瓶中，仍旧以水定容至刻线。将此样品作为样品工作液。取具塞比色管两支，均25 mL。在①管中加入2 mL硼酸-醋酸钠溶液，并将其作为样品空白液，摇匀后静置15 min；在②管中加入2 mL醋酸钠溶液，将其作为样品液，摇匀后立即在①管与②管中均加入10 mL邻苯二胺溶液，将其放置暗处静置40 min，然后在、处采用1 cm比色皿对荧光强度进行测定。
蔬菜果品类：选取某种蔬菜或干鲜果品50 g，将其均匀切碎作为样品，然后加入50 g的1%的草酸溶液，放置捣碎机中捣碎，取出20 g匀浆，以水定容至刻度（50mL），并通过棉花将其过滤至烧杯（100mL）中，加入活性炭2 g，将其快速搅拌3 min左右，静置一定时间，再通过滤纸将其进行过滤。将过滤后溶液取10 mL，放置容量瓶（25mL）中，加水定容至刻度，并将其作为样品工作液。其后步骤与饮料类样品分析相同。测定结果如表1所示。
2 结果与讨论
2.1 对荧光强度造成影响的因素
（1）醋酸钠的影响；在该实验中，Vc加入量达60时，加入醋酸钠溶液后，分别于不同时间加入邻苯二胺溶液对荧光强度的影响是存在差异的。简单来说，加入邻苯二胺后，醋酸钠在溶液中存在的时间越长，荧光强度相对较低，使测定法灵敏度也相对降低。由此可知，当“标准液”“样品液”同样加入醋酸钠后，充分摇匀，应即刻加入邻苯二胺溶液，进而提高灵敏度。（2）活性炭的影响；活性炭作为吸附剂，当其用量过大时，对维生素C也会产生相应的吸附作用，导致荧光强度降低，使测定结果低于实际值。该实验选取活性炭为2g。（3）硼酸-醋酸钠的影响；根据实验可知，硼酸-醋酸钠溶液作为掩蔽剂，当其加入空白管后，需放置900 s，荧光强度才降至最低，反之，其空白值则会高于实际值。
2.2 工作曲线
实验表明，当维生素C含量范围在0-80/14mL之间时，线性关系良好，F=1.974+1.281为其工作曲线回归方程，r=0.9991为相关系数。其中，F为相对荧光强度。因此，本文计算样品维生素C总量的方法为直接定点比较法。Vc含量（mg/mL）=，其中，和分别为样品液与样品空白液的相对荧光强度，与分别为标准液与标准空白液的相对荧光强度，C为标准溶液的浓度（），K为样品的稀释倍数，为单位换算常数。
2.3 变异系数
变异系数V可表示样品测量的重现性。笔者在研究中7次测定了刺梨原汁中的维生素C含量，并对相关数据进行分析（如表2所示），发现刺梨原汁的变异系数为0.51%，由此可见，本文的测定方法具有极高的精密度。
2.4 与经典法相比较
本文用草酸作维生素C提取液（本法），将其与以偏磷酸-醋酸（经典法）作维生素C提取液对同一种食品进行测定，并将其结果进行比较分析（如表3所示）。
由表3可见，采用本法对食品中维生素C的总量进行测定，获得结果精准度较高，具有明显优势。
参考文献
[1]吴晓红，李小华.荧光光度法在食品检测中的应用[J].食品工业，2012（12）：172-175.
[2]穆宏磊，郜海燕，陈杭君，等.荧光光度法测定芦笋中总黄酮含量[J].中国食品学报，2010（2）：201-205.
[3]张耀明.荧光光度法测定食品中的铝[J].山东轻工业学院学报（自然科学版），2010（4）：17-19.
关键词：维生素C 荧光光度法 食品测定
中图分类号：TQ466.3 文献标识码：A 文章编号：1672-5336（2015）02-0020-01
维生素C属于水溶性维生素，又称抗坏血酸（AA）。测量维生素C的方法很多，包括酶法、滴定法、光度法、电化学法等等，其中，关于荧光法测定维生素C的报道少之又少，没有得到有关学者的重视和关注。通过荧光法来测定食品中的抗坏血酸是建立在邻苯二胺（OPDA）基础上的，使其与抗坏血酸发生荧光反应。目前，荧光法由于其灵敏度较高、线性关系较好，被广泛应用于食品检测中，逐渐成为广大分析者争相关注的问题。但是，以偏磷酸-醋酸溶液为提取液的维生素总量的荧光测定方法十分复杂，且提取液难以配制，存放时间较短，对分析速度和准确度产生了不良影响。本文改进和完善了传统的荧光法测定，以草酸替代偏磷酸-醋酸溶液，并且将加醋酸钠及硼酸-醋酸钠的步骤加领苯二胺的步骤相结合，合并在一支试管内进行，在有效延长了存放时间的同时，实现了分析速度的大大提升。
1 实验
1.1 仪器
该实验主要采用产自日本岛津RF-5000荧光分光光度计，实验人员在实验前应做好相应的准备和调试工作。
1.2 试剂
（1）酸性活性炭，取100 g活性炭，以10%的HCL500 mL进行加热至沸腾约120s，再用水清洗3次，后置于120 ℃的高温下进行烘干，以供后期使用。（2）1%草酸水溶液。（3）醋酸钠溶液，实验人员应称取500 g醋酸钠溶液，使其在水中充分溶解，然后定容至1000 mL。（4）硼酸-醋酸钠溶液，称取硼酸9 g，使其充分溶解与35mL的醋酸钠溶液中，并定容至100 mL。在使用前，应注意新鲜配置。（5）邻苯二胺溶液，称取邻苯二胺溶液20 mg，并使其与100 mL水充分溶解，注意应新鲜配置并避光保存。（6）Vc标准液，称取Vc标准液25 mg，用1%的草酸定容至50 mL，使该溶液含有500Vc溶液。
1.3 操作步骤
（1）标准液；取50 mL的Vc标准液500至100 mL烧杯中，后加入活性炭2 g，并采用玻璃棒进行搅拌约120-180 s，静置一段时间后进行过滤。滤后可选取1.5 mL滤液置于25 mL容量瓶中，加水定容至刻度，持续摇匀，该溶液应含，作为标准工作液。
（2）样品液；取25 mL具塞比色管①、②，分别在各具塞比色管中加入2.0 mL标准工作液，再加入2.0 mL硼酸-醋酸钠溶液进入①，摇匀后，放置约900 s；于②中加入2.0 mL醋酸钠溶液，同样摇匀后，向①、②加入10 mL邻苯二胺溶液，将①、②放置于阴暗处约2400 s，后进行荧光强度的测定。
（3）样品分析实例；饮料类：将10 mL样品放入50 mL容量瓶中，将10mL的1%草酸溶液加入其中，以水定容使其到达刻线。然后将定容液倒置100 mL的烧杯中，如果溶液中含有悬浮物或沉淀物，则需要通过滤纸将其过滤到烧杯中。定容液倒置烧杯后，加入活性炭2 g，再用玻璃棒搅拌，剧烈搅拌3 min左右，将其稍稍静置，然后利用滤纸将其过滤。将过滤后的溶液取5 mL，放置25 mL容量瓶中，仍旧以水定容至刻线。将此样品作为样品工作液。取具塞比色管两支，均25 mL。在①管中加入2 mL硼酸-醋酸钠溶液，并将其作为样品空白液，摇匀后静置15 min；在②管中加入2 mL醋酸钠溶液，将其作为样品液，摇匀后立即在①管与②管中均加入10 mL邻苯二胺溶液，将其放置暗处静置40 min，然后在、处采用1 cm比色皿对荧光强度进行测定。
蔬菜果品类：选取某种蔬菜或干鲜果品50 g，将其均匀切碎作为样品，然后加入50 g的1%的草酸溶液，放置捣碎机中捣碎，取出20 g匀浆，以水定容至刻度（50mL），并通过棉花将其过滤至烧杯（100mL）中，加入活性炭2 g，将其快速搅拌3 min左右，静置一定时间，再通过滤纸将其进行过滤。将过滤后溶液取10 mL，放置容量瓶（25mL）中，加水定容至刻度，并将其作为样品工作液。其后步骤与饮料类样品分析相同。测定结果如表1所示。
2 结果与讨论
2.1 对荧光强度造成影响的因素
（1）醋酸钠的影响；在该实验中，Vc加入量达60时，加入醋酸钠溶液后，分别于不同时间加入邻苯二胺溶液对荧光强度的影响是存在差异的。简单来说，加入邻苯二胺后，醋酸钠在溶液中存在的时间越长，荧光强度相对较低，使测定法灵敏度也相对降低。由此可知，当“标准液”“样品液”同样加入醋酸钠后，充分摇匀，应即刻加入邻苯二胺溶液，进而提高灵敏度。（2）活性炭的影响；活性炭作为吸附剂，当其用量过大时，对维生素C也会产生相应的吸附作用，导致荧光强度降低，使测定结果低于实际值。该实验选取活性炭为2g。（3）硼酸-醋酸钠的影响；根据实验可知，硼酸-醋酸钠溶液作为掩蔽剂，当其加入空白管后，需放置900 s，荧光强度才降至最低，反之，其空白值则会高于实际值。
2.2 工作曲线
实验表明，当维生素C含量范围在0-80/14mL之间时，线性关系良好，F=1.974+1.281为其工作曲线回归方程，r=0.9991为相关系数。其中，F为相对荧光强度。因此，本文计算样品维生素C总量的方法为直接定点比较法。Vc含量（mg/mL）=，其中，和分别为样品液与样品空白液的相对荧光强度，与分别为标准液与标准空白液的相对荧光强度，C为标准溶液的浓度（），K为样品的稀释倍数，为单位换算常数。
2.3 变异系数
变异系数V可表示样品测量的重现性。笔者在研究中7次测定了刺梨原汁中的维生素C含量，并对相关数据进行分析（如表2所示），发现刺梨原汁的变异系数为0.51%，由此可见，本文的测定方法具有极高的精密度。
2.4 与经典法相比较
本文用草酸作维生素C提取液（本法），将其与以偏磷酸-醋酸（经典法）作维生素C提取液对同一种食品进行测定，并将其结果进行比较分析（如表3所示）。
由表3可见，采用本法对食品中维生素C的总量进行测定，获得结果精准度较高，具有明显优势。
参考文献
[1]吴晓红，李小华.荧光光度法在食品检测中的应用[J].食品工业，2012（12）：172-175.
[2]穆宏磊，郜海燕，陈杭君，等.荧光光度法测定芦笋中总黄酮含量[J].中国食品学报，2010（2）：201-205.
[3]张耀明.荧光光度法测定食品中的铝[J].山东轻工业学院学报（自然科学版），2010（4）：17-19.