【摘 要】
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目的 探究经典瞬时感受器电位通道(transient receptor potential channels,TRPC)对被动致敏的人气道平滑肌细胞(human airway smooth muscle cells,HASMC)的增殖及其表达和作用.方法 本实验设置分组情况如下:实验组TRPC6阻断剂SKF96365处理的HASMC细胞;TRPC6 siRNA转染的HASMC细胞;对照组TRPC6野生型的HASMC细胞.对不同处理的细胞利用实时荧光定量聚合酶链反应、western blot、细胞计数以及氚
【机 构】
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河南省安阳市第六人民医院呼吸危重症科,河南安阳455000;河南省人民医院(郑州大学人民医院)呼吸与危重症医学科,郑州450003
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目的 探究经典瞬时感受器电位通道(transient receptor potential channels,TRPC)对被动致敏的人气道平滑肌细胞(human airway smooth muscle cells,HASMC)的增殖及其表达和作用.方法 本实验设置分组情况如下:实验组TRPC6阻断剂SKF96365处理的HASMC细胞;TRPC6 siRNA转染的HASMC细胞;对照组TRPC6野生型的HASMC细胞.对不同处理的细胞利用实时荧光定量聚合酶链反应、western blot、细胞计数以及氚胸腺嘧啶核苷掺入试验检测其增殖及其表达和作用.结果 利用western blot检测TRPC6蛋白发现TRPC6阻断剂SKF96365和TRPC6 siRNA转染均能够显著减少HASMC中TRPC6的表达(P<0.05).氚胸腺嘧啶核苷(tritium thymine nucleoside,3H-TdR)掺入实验对TRPC6对HASMC细胞增殖的检测发现10μmol/L的SKF96365处理72 h或TRPC6 siRNA转染细胞48h后,3H-TdR标记的细胞数量显著减少(P<0.05).细胞计数实验发现,TRPC6阻断剂SKF96365使TRPC6基因表达减少后,细胞数目随着SKF96365浓度的升高而减少(P<0.01),在单一浓度10μmol/L的作用下,细胞数目随着SKF96365处理时间的延长增长速度缓慢(P<0.01),同时通过TRPC6 siRNA转染使TRPC6敲除后细胞增殖明显减少.TRPC6阻断剂SKF96365和TRPC6 siRNA转染抑制了TRPC6的表达后,均能够显著降低HASMC中PI3K、AKT、p-AKT、mTOR的表达(P<0.05).结论 TRPC6通过PI3K/Akt/mTOR通路对被动致敏的HASMC的增殖及其表达具有显著的抑制作用,因此本研究为哮喘病的治疗提供新的参考依据.
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