观察Sema3A对小鼠原代视网膜神经节细胞(RGCs)轴突生长的作用。
方法生后24 h内的C57BL/6小鼠，颈椎脱臼法处死后取出眼球，剥离出视网膜组织原代培养RGCs，采用Brn3a免疫荧光染色法鉴定RGCs。将培养7 d的RGCs分为对照组、0.05 μg/ml Sema3A组、0.10 μg/ml Sema3A组和0.50 μg/ml Sema3A组，分别加入相应质量浓度Sema3A处理2 h，采用免疫荧光染色法检测各组细胞中神经元特异性标志物β3-tubulin、树突标志物MAP2的表达，β3-tubulin＋/MAP2－鉴定为轴突，采用Image J软件测量轴突长度；选取0.1 μg/ml Sema3A处理组和对照组细胞，分别于处理后0.5、1和2 h测量轴突长度。根据不同药物处理方式将细胞分为对照组、Sema3A处理组、Y27632处理组和联合处理组，观察并比较各组轴突长度变化。
结果原代培养的细胞Brn3a呈阳性表达，鉴定为RGCs。培养后7 d，RGCs趋于成熟，有完整、细长的神经元突起，可见分支。0.05 μg/ml Sema3A、0.10 μg/ml Sema3A、0.50 μg/ml Sema3A组轴突长度分别为(69.35±1.49)、(60.45±1.42)和(93.65±1.86)μm，均明显短于对照组的(109.80±2.29)μm，差异均有统计学意义(均P<0.01)。0.1 μg/ml Sema3A组1 h和2 h后细胞轴突长度分别为(165.00±4.39)μm和(97.63±2.79)μm，明显短于相应时间对照组的(210.40±4.44)μm和(199.00±4.36)μm，差异均有统计学意义(均P<0.01)；对照组、Sema3A处理组、混合处理组和Y27632处理组轴突长度总体比较，差异有统计学意义(F＝142.50，P<0.01)，其中Sema3A处理组RGCs轴突长度明显短于对照组和混合处理组，差异均有统计学意义(均P<0.01)。
结论Sema3A对小鼠原代RGCs轴突生长具有抑制作用，ROCK信号通路抑制剂可减轻Sema3A对轴突生长的抑制作用。