【摘 要】
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目的:构建杜氏利什曼原虫无鞭毛体蛋白(amastin)编码基因的真核表达重组质粒pcDNA3.1-amastin, 并研究其在NIH3T3细胞中的表达.方法:提取杜氏利什曼原虫基因组DNA进行PCR扩增
【机 构】
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四川大学华西基础医学与法医学院寄生虫学教研室
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目的:构建杜氏利什曼原虫无鞭毛体蛋白(amastin)编码基因的真核表达重组质粒pcDNA3.1-amastin, 并研究其在NIH3T3细胞中的表达.方法:提取杜氏利什曼原虫基因组DNA进行PCR扩增.将扩增的无鞭毛体蛋白基因片段导入质粒pcDNA3.1(+)中, 构建真核表达重组质粒pcDNA3.1-amastin.以pcDNA3.1-amastin转染NIH3T3细胞, 采用免疫荧光染色法和RT-PCR分别鉴定pcDNA3.1-amastin的瞬时表达和稳定表达.结果:在细胞膜和细胞内均观察到较强的绿色荧光, 表明pcDNA3.1-amastin成功地转入NIH3T3细胞, 并在细胞膜和细胞内获得短暂表达.稳定转染的NIH3T3细胞的总RNA经反转录后, 用PCR扩增出无鞭毛体蛋白基因, 表明获得了稳定表达.结论:成功地构建杜氏利什曼原虫无鞭毛体蛋白基因的真核表达重组质粒, 并且该基因在NIH3T3细胞中获得了稳定表达.
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