构建3β-羟类固醇脱氢酶（3β-HSD）基因shRNA慢病毒干扰载体，建立3β-HSD基因沉默细胞株，研究3β-HSD基因沉默对塑化剂邻苯二甲酸二-（2-乙基己）酯（DEHP）致凋亡的影响。
方法根据GenBank提供的3β-HSD基因mRNA序列，设计合成3条干扰序列，退火后连接到PLVX-shRNA2-puro中，将重组慢病毒载体转染293FT细胞，收集病毒上清，感染MCF-7细胞。利用嘌呤霉素筛选得到3β-HSD沉默细胞株，通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）对干扰效果进行鉴定。用不同剂量DEHP对MCF-7细胞和3β-HSD沉默细胞染毒24 h，检测凋亡基因Bax、Caspase-3、Caspase-8的基因和蛋白表达水平的变化。
结果该实验插入慢病毒载体PLVX-shRNA2-puro中的3β-HSD基因干扰序列与设计的序列一致；3β-HSD沉默细胞中3β-HSD基因表达水平较对照组MCF-7细胞降低77%，3β-HSD蛋白表达水平较对照组MCF-7细胞降低74%。不同剂量DEHP染毒3β-HSD沉默细胞和MCF-7细胞后，qRT-PCR结果显示，MCF-7细胞中Bax基因表达水平较对照组（0 mmol/L DEHP）升高28%~54%，Caspase-3基因表达水平升高13%~49%，Caspase-8基因表达升高21%~70%。与同染毒剂量组的MCF-7细胞比较，3β-HSD沉默细胞中Bax基因表达水平降低11%~28%，Caspase-3基因表达降低12%~23%，Caspase-8基因表达降低11%~34%。Western blot结果显示，MCF-7细胞中BAX蛋白表达水平较对照组升高28%~61%，Caspase-3蛋白表达升高40%~48%，Caspase-8蛋白表达升高31%~84%。与同染毒剂量组的MCF-7细胞比较，3β-HSD沉默细胞Bax蛋白表达水平降低11%~27%，Caspase-3蛋白表达降低21%~40%，Caspase-8蛋白表达降低12%~25%。
结论该研究成功构建了3β-HSD基因沉默细胞株。DEHP可引起细胞凋亡基因及蛋白表达升高，3β-HSD基因沉默能在一定程度上抑制DEHP对凋亡基因的活化。