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摘要 [目的]研究安徽产知母药材中知母皂苷BⅡ和芒果苷的含量。[方法]知母皂苷BⅡ采用Diamonsil C18 柱（ 250 mm×4.6 mm，5 μm）、乙腈-水等度洗脱（25∶75），流速1.0 ml/min、ELSD检测器漂移管温度60 ℃、载气流速3.0 ml/min、柱温为室温（25 ℃）；芒果苷采用Diamonsil C18 柱（ 150 mm×4.6 mm，5 μm）、乙腈-0.2%冰醋酸水溶液（15∶85）等度洗脱，流速1.0 ml/min。[结果]知母皂苷BⅡ在 1.036～10.360 μg范围内（r=0.999 6）进样量的对数值与峰面积的对数值呈良好的线性关系，芒果苷在0.05～1.00 μg范围内（r=0.999 4）进样量与峰面积呈良好的线性；知母皂苷BⅡ平均回收率为 99.7%，RSD=1.19%；芒果苷平均回收率为 100.3 %，RSD=1.42%。[结论]安徽省知母药材中知母皂苷BⅡ与芒果苷含量均符合2010版药典含量标准。
关键词 知母；知母皂苷BⅡ；芒果苷；质量分析
中图分类号 S567 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2014）35-12467-02
知母为百合科植物知母Anemarrhena asphodeloides Bge.的干燥根茎[1]，为常用中药，具有滋阴降火、润肠滑燥、止渴除烦、利大小便等作用。知母的化学成分主要为甾体皂苷、双苯吡酮类，知母皂苷 BⅡ是知母甾体总皂苷提取物中的主要皂苷成分，样品测定结果显示，该成分的含量可达 50%以上[2]。《中国药典》规定知母皂苷 BⅡ（timosaponin BⅡ）和芒果苷（mangiferin）为质量控制成分。目前野生资源减少，栽培是知母药材的主要来源。安徽亳州是栽培知母的传统产区和主要产区，大规模人工栽培已经有30多年的历史，种植面积每年保持在2 666.7～3 333.3 hm2，且各种外界环境条件、采收时间对栽培药材质量均有影响[3-4]。笔者采用药典方法测定了 2013 年在安徽亳州采集的 10 批知母样品中知母皂苷 BⅡ 和芒果苷的含量，以了解目前安徽产栽培知母药材的质量现状。
1 材料与方法
1.1 仪器 Waters Alliance 2695高效液相色谱仪；Waters 2424 ELSD检测器；AL204-IC电子分析天平、XSl05型电子天平（METTLER TOLEDO公司）；KQ-500DE超声清洗器（昆山市超声仪器公司）。
1.2 试验材料 知母皂苷BⅡ（批号136656-07-0）和芒果苷（批号111607-200402）均购自中国药品生物制品检定所；该试验10批知母药材样品均购自安徽亳州药材市场。
1.3 化学试剂
乙腈（色谱纯，Honeywell）、甲醇（分析纯，北京化工厂）、乙酸（分析纯，西陇化工股份有限公司）、丙酮（分析纯，北京化工厂）、水（超纯水）。
1.4 试验方法
1.4.1 色谱条件。
1.4.1.1 知母皂苷BⅡ。Diamonsil C8色谱柱（ 250 mm×4.6 mm，5 μm）；柱温为室温；流速为1.0 ml/min；ELSD检测器漂移管温度为60 ℃，载气流速3.0 ml/min ；乙腈-水（25∶75）等度洗脱；进样10 μl。
1.4.1.2 芒果苷。Diamonsil C18 色谱柱（ 150 mm×4.6 mm，5 μm）；检测波长258 nm；柱温为室温（25 ℃）；流速1.0 ml/min；进样量10 μl；流动相与洗脱条件为乙腈-0.2%冰醋酸水溶液（15∶85）等度洗脱。
1.4.2 标准溶液的配制。
精密称定知母皂苷BⅡ对照品2.59 mg，加30%丙酮定容，配制成0.518 mg/ml的对照品溶液。精密称定芒果苷对照品1.50 mg，加稀乙醇配制成浓度为50 μg/ml的对照品溶液。
1.4.3 供试品溶液的制备。
1.4.3.1 知母皂苷BⅡ。取本品粉末（过三号筛）约0.15 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入30%丙酮25 ml，称定重量，超声处理（功率400 W，频率40 kHz） 30 min，取出，放冷，再称定重量，用30%丙酮补足减失的重量，摇匀。经0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
1.4.3.2 芒果苷。取本品粉末（过三号筛）约0.1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇（50.0%）25 ml，称定重量，超声处理（功率400 W，频率40 kHz）30 min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，经0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
1.4.4 标准曲线的制作。 吸取知母皂苷 BⅡ对照品溶液2、4、8、10、15、20 μl注入液相色谱仪，按“1.4.1.1”色谱条件测定，以进样质量的对数值lnM为横坐标（X）、峰面积的对数值lnS为纵坐标（Y）绘制标准曲线。吸取芒果苷对照品溶液2、4、8、10、15、20 μl注入液相色谱仪，按“1.4.1.2”色谱条件测定，以芒果苷的峰面积为纵坐标、芒果苷的质量为横坐标绘制标准曲线。
2 结果与分析
2.1 线性关系考察
经分析，知母皂苷 BⅡ的回归方程为Y=1.437 2X +1.546 6（r=0.999 6），可见知母皂苷 BⅡ在进样量为1.036～10.360 μg范围内呈良好的线性关系；芒果苷的回归方程为Y=1 838 915X -54 731（r=0.999 4），表明芒果苷在0.05～1.00 μg与峰面积呈良好的线性关系。
2.2 精密度试验
2.2.1 知母皂苷。取同一样品（1号）溶液连续进样6次（n=6），注入10 μl进行 HPLC-ELSD 测定，结果发现知母皂苷BⅡ的峰面积RSD值为 1.76%，符合精密度要求；连续进样 3 d，每天6次，记录峰面积，以上指标成分日间精密度 RSD为 2.87%，表明精密度良好。 2.2.2 芒果苷。同一样品（1号）溶液连续进样6次（n=6），注入10 μl进行 HPLC 测定，结果发现芒果苷的峰面积 RSD 值为2.53%，符合精密度要求；连续进样 3 d，每天 6 次，记录峰面积，以上指标成分日间精密度 RSD 为 3.54%，表明精密度良好。
2.3 稳定性考察
取同一知母样品（1号）知母供试品溶液，分别于0、3、6、12、24 h注入 10 μl 进行 HPLC 测定，结果表明，知母皂苷BⅡ 和芒果苷的峰面积RSD值分别为1.56%、2.05%，表明2个化合物在 24 h内稳定。
2.4 重现性考察
取同一知母样品（1号）6 份，精密称定，按供试品制备方法，制备成供试品溶液，注入10 μl进行 HPLC 测定，结果表明，知母皂苷BⅡ和芒果苷的峰面积 RSD 值分别为 2.07%、2.79%，表明该方法具有良好的重现性。
2.5 加样回收率试验
2.5.1 知母皂苷BⅡ。取知母样品（1号）6 份，每份 0.075 g，精密称定，分别加入与供试品中含量相等的知母皂苷BⅡ对照品，按“1.4.3.1”项下方法制备供试品溶液，在“1.4.1.1”项色谱条件下进样，记录色谱峰峰面积，计算回收率。结果表明（表1），知母皂苷BⅡ平均回收率为99.7%，RSD为1.19。
2.5.2 芒果苷。取已知含量的知母样品（1号）6 份，每份 0.05 g，精密称定，分别加入与供试品中含量相等的芒果苷对照品，按“1.4.3.2”项下方法制备供试品溶液，在“1.4.1.2”项芒果苷色谱条件下进样，记录色谱峰峰面积，计算回收率。由表1 可见，芒果苷的平均回收率为100.3%，RSD为1.42%。
2.6 样品含量测定结果 按照“1.4.3”项下方法制备样品，并按照“1.4.1”项下色谱条件对安徽省10份知母样品进行分析，知母皂苷BII和芒果苷的色谱图如图1～2所示。由表2可见，知母药材中知母皂苷BII和芒果苷的含量范围分别为3.22%～6.03%、0.43%～1.17%。
3 讨论
该试验中所测知母药材中知母皂苷BⅡ和芒果苷的含量范围分别为3.22%～6.03%、0.43%～1.17%，均分别高于2010版药典2.00%与0.40%。安徽产各批知母药材均符合2010版中国药典标准，但不同样品间知母皂苷BⅡ含量相差达2倍，芒果苷则相差将近3倍。
该试验所测安徽亳州产知母药材中知母皂苷BⅡ和芒果苷的含量与已报道的这2个成分的含量相比[4-5]，各地知母药材知母皂苷BⅡ含量变化范围较大，安徽亳州产知母药材中知母皂苷BⅡ含量变化较小。内蒙古赤峰药材中芒果苷的含量略高于其他产地，但各地含量范围在0.99%～1.59%[5]，而该试验发现安徽产药材中芒果苷的含量稍低。
参考文献
[1]
国家药典委员会.中国药典2010年版.一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010.
[2] 原源，陈万生，孙连娜，等.知母商品药材中的皂苷类成分含量测定[J].中国医院药学杂志，2006，26（6）：656.
[3] 俞年军，马义雯，于娇，等.亳州栽培知母最佳采收期研究[J].安徽中医药大学学报，2014，33（2）：91-93.
[4] 陈千良，孙小明，王文全，等.HPLC-ELSD 法同时测定知母药材中 2 种皂苷含量[J].中国中药杂志，2011，36（4）：475-477.
[5] 梁雷，边宝林，王宏洁，等.不同产地知母药材中芒果苷和知母皂苷 BⅡ的含量测定[J].中国实验方剂学杂志，2010，16（16）：49-51.
关键词 知母；知母皂苷BⅡ；芒果苷；质量分析
中图分类号 S567 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2014）35-12467-02
知母为百合科植物知母Anemarrhena asphodeloides Bge.的干燥根茎[1]，为常用中药，具有滋阴降火、润肠滑燥、止渴除烦、利大小便等作用。知母的化学成分主要为甾体皂苷、双苯吡酮类，知母皂苷 BⅡ是知母甾体总皂苷提取物中的主要皂苷成分，样品测定结果显示，该成分的含量可达 50%以上[2]。《中国药典》规定知母皂苷 BⅡ（timosaponin BⅡ）和芒果苷（mangiferin）为质量控制成分。目前野生资源减少，栽培是知母药材的主要来源。安徽亳州是栽培知母的传统产区和主要产区，大规模人工栽培已经有30多年的历史，种植面积每年保持在2 666.7～3 333.3 hm2，且各种外界环境条件、采收时间对栽培药材质量均有影响[3-4]。笔者采用药典方法测定了 2013 年在安徽亳州采集的 10 批知母样品中知母皂苷 BⅡ 和芒果苷的含量，以了解目前安徽产栽培知母药材的质量现状。
1 材料与方法
1.1 仪器 Waters Alliance 2695高效液相色谱仪；Waters 2424 ELSD检测器；AL204-IC电子分析天平、XSl05型电子天平（METTLER TOLEDO公司）；KQ-500DE超声清洗器（昆山市超声仪器公司）。
1.2 试验材料 知母皂苷BⅡ（批号136656-07-0）和芒果苷（批号111607-200402）均购自中国药品生物制品检定所；该试验10批知母药材样品均购自安徽亳州药材市场。
1.3 化学试剂
乙腈（色谱纯，Honeywell）、甲醇（分析纯，北京化工厂）、乙酸（分析纯，西陇化工股份有限公司）、丙酮（分析纯，北京化工厂）、水（超纯水）。
1.4 试验方法
1.4.1 色谱条件。
1.4.1.1 知母皂苷BⅡ。Diamonsil C8色谱柱（ 250 mm×4.6 mm，5 μm）；柱温为室温；流速为1.0 ml/min；ELSD检测器漂移管温度为60 ℃，载气流速3.0 ml/min ；乙腈-水（25∶75）等度洗脱；进样10 μl。
1.4.1.2 芒果苷。Diamonsil C18 色谱柱（ 150 mm×4.6 mm，5 μm）；检测波长258 nm；柱温为室温（25 ℃）；流速1.0 ml/min；进样量10 μl；流动相与洗脱条件为乙腈-0.2%冰醋酸水溶液（15∶85）等度洗脱。
1.4.2 标准溶液的配制。
精密称定知母皂苷BⅡ对照品2.59 mg，加30%丙酮定容，配制成0.518 mg/ml的对照品溶液。精密称定芒果苷对照品1.50 mg，加稀乙醇配制成浓度为50 μg/ml的对照品溶液。
1.4.3 供试品溶液的制备。
1.4.3.1 知母皂苷BⅡ。取本品粉末（过三号筛）约0.15 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入30%丙酮25 ml，称定重量，超声处理（功率400 W，频率40 kHz） 30 min，取出，放冷，再称定重量，用30%丙酮补足减失的重量，摇匀。经0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
1.4.3.2 芒果苷。取本品粉末（过三号筛）约0.1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇（50.0%）25 ml，称定重量，超声处理（功率400 W，频率40 kHz）30 min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，经0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
1.4.4 标准曲线的制作。 吸取知母皂苷 BⅡ对照品溶液2、4、8、10、15、20 μl注入液相色谱仪，按“1.4.1.1”色谱条件测定，以进样质量的对数值lnM为横坐标（X）、峰面积的对数值lnS为纵坐标（Y）绘制标准曲线。吸取芒果苷对照品溶液2、4、8、10、15、20 μl注入液相色谱仪，按“1.4.1.2”色谱条件测定，以芒果苷的峰面积为纵坐标、芒果苷的质量为横坐标绘制标准曲线。
2 结果与分析
2.1 线性关系考察
经分析，知母皂苷 BⅡ的回归方程为Y=1.437 2X +1.546 6（r=0.999 6），可见知母皂苷 BⅡ在进样量为1.036～10.360 μg范围内呈良好的线性关系；芒果苷的回归方程为Y=1 838 915X -54 731（r=0.999 4），表明芒果苷在0.05～1.00 μg与峰面积呈良好的线性关系。
2.2 精密度试验
2.2.1 知母皂苷。取同一样品（1号）溶液连续进样6次（n=6），注入10 μl进行 HPLC-ELSD 测定，结果发现知母皂苷BⅡ的峰面积RSD值为 1.76%，符合精密度要求；连续进样 3 d，每天6次，记录峰面积，以上指标成分日间精密度 RSD为 2.87%，表明精密度良好。 2.2.2 芒果苷。同一样品（1号）溶液连续进样6次（n=6），注入10 μl进行 HPLC 测定，结果发现芒果苷的峰面积 RSD 值为2.53%，符合精密度要求；连续进样 3 d，每天 6 次，记录峰面积，以上指标成分日间精密度 RSD 为 3.54%，表明精密度良好。
2.3 稳定性考察
取同一知母样品（1号）知母供试品溶液，分别于0、3、6、12、24 h注入 10 μl 进行 HPLC 测定，结果表明，知母皂苷BⅡ 和芒果苷的峰面积RSD值分别为1.56%、2.05%，表明2个化合物在 24 h内稳定。
2.4 重现性考察
取同一知母样品（1号）6 份，精密称定，按供试品制备方法，制备成供试品溶液，注入10 μl进行 HPLC 测定，结果表明，知母皂苷BⅡ和芒果苷的峰面积 RSD 值分别为 2.07%、2.79%，表明该方法具有良好的重现性。
2.5 加样回收率试验
2.5.1 知母皂苷BⅡ。取知母样品（1号）6 份，每份 0.075 g，精密称定，分别加入与供试品中含量相等的知母皂苷BⅡ对照品，按“1.4.3.1”项下方法制备供试品溶液，在“1.4.1.1”项色谱条件下进样，记录色谱峰峰面积，计算回收率。结果表明（表1），知母皂苷BⅡ平均回收率为99.7%，RSD为1.19。
2.5.2 芒果苷。取已知含量的知母样品（1号）6 份，每份 0.05 g，精密称定，分别加入与供试品中含量相等的芒果苷对照品，按“1.4.3.2”项下方法制备供试品溶液，在“1.4.1.2”项芒果苷色谱条件下进样，记录色谱峰峰面积，计算回收率。由表1 可见，芒果苷的平均回收率为100.3%，RSD为1.42%。
2.6 样品含量测定结果 按照“1.4.3”项下方法制备样品，并按照“1.4.1”项下色谱条件对安徽省10份知母样品进行分析，知母皂苷BII和芒果苷的色谱图如图1～2所示。由表2可见，知母药材中知母皂苷BII和芒果苷的含量范围分别为3.22%～6.03%、0.43%～1.17%。
3 讨论
该试验中所测知母药材中知母皂苷BⅡ和芒果苷的含量范围分别为3.22%～6.03%、0.43%～1.17%，均分别高于2010版药典2.00%与0.40%。安徽产各批知母药材均符合2010版中国药典标准，但不同样品间知母皂苷BⅡ含量相差达2倍，芒果苷则相差将近3倍。
该试验所测安徽亳州产知母药材中知母皂苷BⅡ和芒果苷的含量与已报道的这2个成分的含量相比[4-5]，各地知母药材知母皂苷BⅡ含量变化范围较大，安徽亳州产知母药材中知母皂苷BⅡ含量变化较小。内蒙古赤峰药材中芒果苷的含量略高于其他产地，但各地含量范围在0.99%～1.59%[5]，而该试验发现安徽产药材中芒果苷的含量稍低。
参考文献
[1]
国家药典委员会.中国药典2010年版.一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010.
[2] 原源，陈万生，孙连娜，等.知母商品药材中的皂苷类成分含量测定[J].中国医院药学杂志，2006，26（6）：656.
[3] 俞年军，马义雯，于娇，等.亳州栽培知母最佳采收期研究[J].安徽中医药大学学报，2014，33（2）：91-93.
[4] 陈千良，孙小明，王文全，等.HPLC-ELSD 法同时测定知母药材中 2 种皂苷含量[J].中国中药杂志，2011，36（4）：475-477.
[5] 梁雷，边宝林，王宏洁，等.不同产地知母药材中芒果苷和知母皂苷 BⅡ的含量测定[J].中国实验方剂学杂志，2010，16（16）：49-51.