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目的对6-羧基二乙酸荧光素/碘化丙啶(6-CFDA/PI)双荧光标记方法进行改良并应用于人精子质膜完整性的检测,并与单用伊红Y染色、低渗肿胀试验(HOS)两种检测方法进行比较。方法随机选择30例本所人类精子库志愿者精液标本(密度≥20×10~6/ml、活力(a+b)≥50%),分别采用单用伊红Y染色、HOS和6-CFDA/PI双荧光标记试验检测精子质膜完整性。结果30例精液标本伊红Y染色活精子比率、HOS肿胀精子数比率、6-CFDA/PI双荧光标记结果分别为(68.8±7.6)%、(68.7±7.8)%和(67.9±7.8)%,两两比较,无显著性差异(P均>0.05),但双荧光标记能显示死活精子的过渡状态。相关性分析结果显示,三种方法检测的活精子比率均与前向运动(a+b)精子呈显著正相关。结论6-CFDA/PI双荧光标记检测方法与单用伊红染色、HOS两种常用检测精子质膜完整性方法具有一致性,同时能鉴定出精子过渡的中间状态。